高烏頭組織培養(yǎng)的初步研究.pdf

1、本試驗(yàn)對(duì)高烏頭（Aconitum Smomontanum Nakai）組織培養(yǎng)進(jìn)行了初步的探索，分別在無(wú)菌培養(yǎng)體系的建立、誘導(dǎo)愈傷組織、芽的誘導(dǎo)和生長(zhǎng)、壯苗生根移栽等四個(gè)階段研究了各主要因子對(duì)培養(yǎng)物的影響，得出如下結(jié)論:
　　 1、無(wú)菌培養(yǎng)體系的建立野生高烏頭植株移栽到室內(nèi)經(jīng)過(guò)一段時(shí)間生長(zhǎng),等到長(zhǎng)出新芽和新葉再取樣接種。接種前對(duì)外植體進(jìn)行消毒處理,最佳的消毒液組合是0.1％HgCI2溶液16min，2％次氯酸鈉溶液10min，2

2、-3滴的吐溫20。通過(guò)對(duì)供試材料進(jìn)行篩選得知，基生芽和基生葉是芽誘導(dǎo)的最好材料；種子萌發(fā)獲得的幼苗和試管苗的葉片、葉柄是誘導(dǎo)愈傷組織的最好材料。
　　 2、愈傷組織誘導(dǎo)和增殖MS和B5培養(yǎng)基在光暗交替和黑暗條件下添加0.5-4.0mg·L-1的2,4-D均可誘導(dǎo)出高烏頭愈傷組織。作為外植體，高烏頭的子葉、胚軸、葉柄和葉片都可順利誘導(dǎo)出愈傷組織。生長(zhǎng)素2,4-D能促進(jìn)高烏頭外植體脫分化形成愈傷組織，而NAA則抑制愈傷組織的形成；細(xì)

3、胞分裂素KT和BA均能促進(jìn)高烏頭愈傷組織的形成。在B5+2,4-D 2.0mg·L-1+BA 1.0mg·L-1培養(yǎng)基上，光照14h·d-1，溫度22±1℃，最有利于高烏頭愈傷組織的誘導(dǎo)。
　　 高烏頭愈傷組織的增殖率較低，在B5+2,4-D2.0mg·L-1+KT0.3mg·L-1培養(yǎng)基上，愈傷組織的增殖效果相對(duì)較好，光照14 h·d-1，溫度22±1℃，繼代培養(yǎng) 20d后，增殖率可達(dá)197.5％。但隨著2,4-D濃度增大到3

4、.0mg·L-1以上，愈傷組織的增殖生長(zhǎng)受到抑制。
　　 3、芽的誘導(dǎo)。
　　 在MS+BA1.0mg·L-1+NAA0.1mg·L-1培養(yǎng)基上,基生芽、基生葉的腋芽和不帶腋芽的基生葉葉柄經(jīng)過(guò)誘導(dǎo)均可得到叢生芽，但基生芽和基生葉的腋芽的分化率不高，一般可誘導(dǎo)出1-2芽體，基生芽誘導(dǎo)的單芽芽體強(qiáng)壯，葉片呈深綠色，基生葉的腋芽誘導(dǎo)的芽體較弱小，芽體和葉片呈淺綠色；不帶腋芽的基生葉葉柄經(jīng)過(guò)40天左右的培養(yǎng)，基部可以誘導(dǎo)出4-5

5、個(gè)芽，單芽芽體強(qiáng)壯，葉片呈深綠色。
　　 因此，不帶腋芽的基生葉葉柄是誘導(dǎo)叢生芽的最好材料。
　　 不帶腋芽的基生葉葉柄產(chǎn)生不定芽及對(duì)不定芽的生長(zhǎng)最適宜的基本培養(yǎng)基是MS; BA可誘導(dǎo)產(chǎn)生叢生芽,最佳濃度1.0mg·L-1，而KT未能誘導(dǎo)叢生芽,含NAA培養(yǎng)基能誘導(dǎo)葉片產(chǎn)生較多叢生芽。
　　 4、試管苗的壯苗、生根和移栽將叢生芽上的單芽切下，在MS+BA0.5mg·L-1+NAA0.1mg·L-1培養(yǎng)基上繼代培養(yǎng)

6、，能獲得健壯的試管苗。B5比MS和1/2MS 更利于試管苗的生根和芽苗的生長(zhǎng)；NAA誘導(dǎo)生根效果稍?xún)?yōu)于IBA，適宜生根培養(yǎng)基是MS+NAA0.3mg·L-1。
　　 高烏頭試管苗在腐殖土占三分之一的基質(zhì)土壤中移栽可獲得較高成活率。
　　 5、 抗褐變的措施實(shí)驗(yàn)通過(guò)對(duì)抗褐變劑篩選發(fā)現(xiàn)，不同的抗褐變劑對(duì)芽培養(yǎng)的影響是不同的，Vc(1000mg·L-1)最適宜作為高烏頭芽培養(yǎng)的抗褐變劑，外植體切口呈微褐色，芽葉呈深綠色，長(zhǎng)勢(shì)好