有氧運動干預(yù)高脂膳食大鼠生精細(xì)胞凋亡miRNA的研究.pdf

1、實驗?zāi)康?
　　探討mi RNA對高脂膳食誘導(dǎo)的肥胖大鼠生精細(xì)胞凋亡的調(diào)控，并初步揭示有氧運動對雄性高脂膳食大鼠生精細(xì)胞凋亡的mi RNA干預(yù)作用。
　　實驗方法:
　　將48只雄性健康SD大鼠隨機分為4組:普通膳食對照組(A)、高脂膳食組(B)、普通膳食+運動組(C)、高脂膳食+運動組(D)，每組各12只;A組和C組，普通飼料喂養(yǎng);B組和D組，高脂、高熱量飼料喂養(yǎng)。C組及D組大鼠進(jìn)行10周60min無負(fù)重游泳運動，每

2、周6天。實驗結(jié)束后，各組大鼠數(shù)量為A組8只，B組11只，C組10只，D組11，測量大鼠體重及睪周脂重。將A組大鼠分為A01、A02、A03三組;B組大鼠分為B01、B02、B03三組;C組大鼠分為C01、C02、C03三組;D組大鼠分為D01、D02、D03三組，對其進(jìn)行文庫構(gòu)建，共構(gòu)建12組c DNA文庫，利用Solexa高通量測序技術(shù)結(jié)合生物信息分析鑒定mi RNA并進(jìn)行差異表達(dá)譜的分析，進(jìn)一步選擇部分差異mi RNA，分析其生物學(xué)

3、功能。
　　實驗結(jié)果:
　　1.通過Solexa測序技術(shù)，成功構(gòu)建了大鼠的基因文庫，經(jīng)檢測得到每組高質(zhì)量的純凈序列(Clean Data)均大于20M，均占原始數(shù)據(jù)87％以上，Q30均在95％以上。對文庫中的純凈序列進(jìn)行了分類注釋，獲得包含mi RNA的Unannotated reads。并將小RNA的純凈序列定位到大鼠的基因組，以備后續(xù)的研究。
　　2.通過生物學(xué)分析，從A組、B組、C組、D組四組睪丸組織中共鑒定出4

4、64個mi RNA，其中315個為已知mi RNA和149個為新的mi RNA。根據(jù)|log2(FC)|≥1進(jìn)行文庫測序的mi RNA差異表達(dá)分析顯示:B組對A組差異表達(dá)顯著mi RNA有27個，其中3個上調(diào)，24個下調(diào)。C組對A組差異表達(dá)mi RNA有11個，其中0個上調(diào)，11個下調(diào)。D組對A組差異表達(dá)mi RNA有62個，其中37個上調(diào)，25個下調(diào)。
　　3.根據(jù)|log2(FC)|≥1重點分析A與B組mi RNA的表達(dá)差異，

5、B組對A組差異表達(dá)mi RNA有27個，其中3個上調(diào)，24個下調(diào)，共預(yù)測到19612個靶基因，其中24個下調(diào)mi RNAs為:rno-miR-101a-5p，57個;rno-miR-101a-3p，4個;mo-miR-135b-3p，465個等;3個上調(diào)mi RNAs:mo-miR-130b-5p，164個;rno-miR-346，2963個;unconservative_6_3922464，3220個。
　　4.GO分類可知，對

6、照組A組和高脂膳食組B組存在差異的mi RNA基因，其對應(yīng)的靶基因在代謝方面、生殖方面、細(xì)胞死亡、免疫系統(tǒng)等方面均有所表達(dá);在KEGG通路中分類可知，差異表達(dá)mi RNA靶基因在Pathways in cancer、MAPK signaling pathway、Wntsignaling pathway、Axonguidance、Apoptosis等方面均表達(dá)。
　　5.通過與NR、Swiss-Prot、Pfam數(shù)據(jù)庫比對，獲得與有

7、性生殖有關(guān)的mi RNA有:rno-miR-6328;rno-miR-196b-5p;rno-miR-346;unconservative_6_3922464;mo-miR-503-5p。與細(xì)胞凋亡有關(guān)的mi RNA有:mo-miR-6328;mo-miR-3075;rno-miR-346;rno-miR-130b-5p;rno-miR-205;rno-miR-31a-5p;rno-miR-503-5p;unconservative_1

8、_540112;unconservative_6_3922464。進(jìn)一步發(fā)現(xiàn)，以上mi RNA通過Bcl、Bax兩個途徑進(jìn)行生精細(xì)胞凋亡的。
　　結(jié)論:
　　1.本實驗通過高通量測序方法成功獲得普通膳食大鼠、高脂膳食大鼠、普通運動組和高脂運動組睪丸的mi RNA的c DNA文庫。首次對大鼠睪丸組織進(jìn)行了micro RNA組學(xué)分析，共鑒定出464個mi RNA，其中315個為已知mi RNA和149個為新的mi RNA。

9、>　　2.較多的miRNA在高脂膳食的大鼠睪丸中呈下調(diào)趨勢，進(jìn)行有氧干預(yù)后，普通組較多的mi RNA呈上調(diào)，總之，差異的miRNA，都在有氧運動后發(fā)生表達(dá)量的改變，使其生物學(xué)功能發(fā)生改變。
　　3.通過GO、KEGG通路中分類可知，對照組A組和高脂膳食組B組差異的miRNA基因，與有性生殖、細(xì)胞死亡等有關(guān)。
　　4.通過與NR、Swiss-Prot、Pfam數(shù)據(jù)庫比對，我們認(rèn)為高脂膳食引起肥胖的大鼠生殖細(xì)胞通過Bcl、Bax

10、途徑凋亡有關(guān)的miRNA有:rno-miR-6328; rno-miR-3075;rno-miR-130b-5p;rno-miR-346;rno-miR-503-5p;rno-miR-205;rno-miR-31a-5p;unconservative_6_3922464;unconservative_1_540112;與有性生殖有關(guān)的miRNA有:unconservative_6_3922464;rno-miR-196b-5p;rno-