有氧運(yùn)動(dòng)對(duì)高脂膳食誘導(dǎo)的肥胖大鼠睪丸CRP與MCP-1表達(dá)以及生精細(xì)胞凋亡的影響.pdf

1、實(shí)驗(yàn)?zāi)康?
　　探討高脂膳食誘導(dǎo)的肥胖大鼠睪丸組織生精細(xì)胞凋亡與炎癥因子CRP、MCP-1的關(guān)系，并研究有氧運(yùn)動(dòng)對(duì)雄性高脂膳食大鼠生精細(xì)胞凋亡與炎癥反應(yīng)的干預(yù)作用。
　　實(shí)驗(yàn)方法:
　　將雄性健康SD大鼠隨機(jī)分為4組:普通膳食對(duì)照組(C)、高脂膳食組(HF)、普通膳食+運(yùn)動(dòng)組(CE)、高脂膳食+運(yùn)動(dòng)組(HE)，每組各12只，共48只;C組和CE組大鼠，普通飼料喂養(yǎng);HF組和HE組大鼠，高脂、高熱量飼料喂養(yǎng)。實(shí)驗(yàn)結(jié)束后，

2、各組大鼠數(shù)量為:C組8只，HF組11只，CE組10只，HE組11只。CE組及HE組大鼠進(jìn)行10周60min無(wú)負(fù)重游泳運(yùn)動(dòng)，每周6天。實(shí)驗(yàn)結(jié)束后檢測(cè)各組大鼠血清中總膽固醇(TC)、甘油三脂(TG)、高密度脂蛋白(HDL)、低密度脂蛋白(LDL);測(cè)量大鼠體重、體長(zhǎng)及睪周脂肪、腎周脂肪重量，計(jì)算Lee's指數(shù)及脂體比;酶聯(lián)免疫吸附法(ELISA)及蛋白印記法(Western Blot)測(cè)定C反應(yīng)蛋白(CRP)、單核細(xì)胞趨化蛋白1(MCP-1

3、)水平;免疫組化法檢測(cè)睪丸組織中CRP、MCP-1表達(dá)位置;RT-PCR測(cè)定大鼠睪丸及睪周脂中CRP、MCP-1的表達(dá)量;原位缺口末端標(biāo)記法(TUNEL)檢測(cè)大鼠睪丸組織細(xì)胞凋亡情況;HE染色觀察睪丸組織形態(tài)學(xué)的變化。
　　實(shí)驗(yàn)結(jié)果:
　　1.實(shí)驗(yàn)10周后，與C組相比，CE組大鼠體重呈極顯著降低，Lee's指數(shù)、TG顯著降低，HDL極顯著升高，睪周脂、脂體比、TC、LDL無(wú)顯著性差異。HF組與C組相比，體重、睪周脂、脂體比、

4、Lee's指數(shù)、LDL、TC均呈極顯著升高，TG、HDL均無(wú)明顯差異。與HF組相比，HE組大鼠體重、睪周脂、Lee's、脂體比、LDL均極顯著降低，TC、TG呈顯著降低，HDL無(wú)顯著性差異。
　　2.HE染色結(jié)果:C組大鼠生精小管內(nèi)各級(jí)生精細(xì)胞發(fā)育正常，排列緊密，細(xì)胞結(jié)構(gòu)清晰，管腔內(nèi)可見(jiàn)大量成熟精子，同時(shí)可以明顯地看到生精小管之間的睪丸間質(zhì)細(xì)胞;HF組生精小管管壁變薄，各級(jí)生精細(xì)胞排列混亂，細(xì)胞層數(shù)和成熟精子數(shù)量明顯減少，可見(jiàn)細(xì)胞

5、脫落現(xiàn)象，生精小管基膜不完整，間質(zhì)細(xì)胞明顯減少;CE組大鼠生精小管基本正常，各級(jí)生精細(xì)胞排列基本有序，細(xì)胞間隙增大;HE組各級(jí)生精細(xì)胞發(fā)育基本正常，偶見(jiàn)細(xì)胞脫落現(xiàn)象，生精小管間間質(zhì)組織疏松分布。
　　3.與C組相比，HF組大鼠血清中CRP水平極顯著升高，MCP-1水平顯著升高，CE組大鼠血清CRP、MCP-1無(wú)明顯差異。HE組與HF組相比，CRP、MCP-1水平均呈顯著降低。分析可知，高脂膳食可引起大鼠血清中CRP與MCP-1水平

6、增加，而有氧運(yùn)動(dòng)能夠降低血清CRP及MCP-1水平。
　　4.與C組相比，HF組睪周脂中CRPmRNA水平極顯著升高，MCP-1 mRNA水平顯著升高，CE組大鼠睪周脂中CRP、MCP-1mRNA水平有所上升，但無(wú)顯著性差異。HE組與HF組相比，CRPmRNA水平極顯著降低，MCP-1 mRNA水平顯著降低。由此可知，高脂膳食使大鼠睪周脂中CRP、MCP-1mRNA水平升高，引起睪周脂炎癥反應(yīng)，而有氧運(yùn)動(dòng)可適當(dāng)降低CRP、MCP-

7、1 mRNA水平，減輕炎癥狀態(tài)。
　　5.與C組相比，HF組睪丸組織CRP、MCP-1 mRNA水平極顯著升高，CE組大鼠睪丸組織CRP、MCP-1 mRNA無(wú)顯著性差異。HE組與HF組相比，CRP、MCP-1 mRNA水平極顯著降低。高脂膳食使大鼠睪丸組織中CRP、MCP-1 mRNA水平升高，引起睪丸炎癥反應(yīng)，而有氧運(yùn)動(dòng)能夠降低CRP、MCP-1 mRNA水平，減緩炎癥反應(yīng)。
　　6.蛋白印記法測(cè)定蛋白表達(dá)結(jié)果:HF組與

8、C組相比，CRP、MCP-1蛋白表達(dá)水平極顯著升高;CE組與C組相比，CRP、MCP-1蛋白表達(dá)水平無(wú)顯著性差異。HE組與HF組相比，CRP、MCP-1蛋白表達(dá)水平顯著降低，高脂膳食引發(fā)的睪丸炎性狀態(tài)，通過(guò)運(yùn)動(dòng)能夠改善。
　　7.免疫組化結(jié)果:在C組大鼠睪丸組織中未見(jiàn)CRP、MCP-1有表達(dá);高脂膳食HF組，發(fā)現(xiàn)CRP在睪丸間質(zhì)細(xì)胞有表達(dá)，而MCP-1在睪丸間質(zhì)細(xì)胞和支持細(xì)胞都有部分表達(dá);CE組及HE組大鼠睪丸組織中較低水平的CR

9、P表達(dá)，HE組也可見(jiàn)少量MCP-1的表達(dá)，而CE組未發(fā)現(xiàn)有MCP-1表達(dá)。大鼠有氧運(yùn)動(dòng)后可降低CRP、MCP-1的表達(dá)水平。
　　8.大鼠睪丸組織中凋亡細(xì)胞情況:與C組相比，CE組睪丸組織中生精細(xì)胞凋亡率有所升高，但無(wú)明顯差異，HF組和HE組睪丸組織中生殖細(xì)胞凋亡率極顯著升高。HE組與HF組相比，睪丸組織中生殖細(xì)胞凋亡率極顯著降低。通過(guò)單因素方差分析可知，高脂膳食可能引起睪丸組織的炎癥反應(yīng)，從而導(dǎo)致睪丸組織中生殖細(xì)胞凋亡增加，而有

10、氧運(yùn)動(dòng)可以緩解這一情況。
　　結(jié)論:
　　1.高脂膳食能夠引發(fā)SD雄性大鼠脂代謝紊亂，通過(guò)氧運(yùn)動(dòng)能改善這一情況。
　　2.高脂膳食喂養(yǎng)可使SD雄性大鼠睪丸組織結(jié)構(gòu)發(fā)生變化，并且使得生精細(xì)胞凋亡明顯增多，而有氧運(yùn)動(dòng)能使這一情況得到改善。
　　3.高脂膳食喂養(yǎng)的大鼠生精細(xì)胞凋亡和CRP、MCP-1表達(dá)具有相關(guān)性，而有氧運(yùn)動(dòng)的大鼠其CRP、MCP-1的表達(dá)及精子凋亡率也有所降低，提示機(jī)體可能在高脂膳食誘導(dǎo)炎癥時(shí)引發(fā)睪丸