高壓電燒傷大鼠血小板膜糖蛋白GPⅠa-Ⅱa及GPⅣ的表達(dá)及己酮可可堿、烏司他丁干預(yù)作用.pdf

1、目的:電能作為一種清潔高效的能源，在人們生產(chǎn)生活中扮演著不可替代的角色。然而電力在給人們帶來方便的同時(shí)，電燒傷給人們帶來的傷害也不容忽視。特別是高壓電燒傷，具有病理機(jī)制復(fù)雜、對機(jī)體影響廣泛、并發(fā)癥多等特點(diǎn)。因此高壓電燒傷的治療一直以來都是困擾臨床醫(yī)生的一個(gè)難題。設(shè)計(jì)本實(shí)驗(yàn)的目的就是為臨床治療提供一些參考資料，為高壓電燒傷患者的康復(fù)略盡綿薄之力。
　　通常，高壓電流進(jìn)入機(jī)體，將沿電阻較小的血管走行，這一過程將造成血管壁損傷，膠原暴露

2、，血小板激活，血小板表面膜糖蛋白結(jié)構(gòu)發(fā)生變化，導(dǎo)致血小板發(fā)生粘附、聚集、釋放等動(dòng)作，產(chǎn)生微血栓。前期試驗(yàn)已證明高壓電燒傷可使大鼠機(jī)體小板膜糖蛋白GPⅠb/Ⅸ/Ⅳ表達(dá)量降低、GPⅡ b/Ⅲa的表達(dá)量升高，血小板激活，血栓形成，血流緩慢，微循環(huán)障礙。己酮可可堿可降低血小板活化程度，改善微循環(huán)障礙。本次試驗(yàn)通過建立高壓電擊傷大鼠實(shí)驗(yàn)?zāi)Ｐ?，進(jìn)一步觀察高壓電流對血小板膜糖蛋白GPⅠa/Ⅱa及GPⅣ的影響及己酮可可堿(PTX)、烏司他丁(UTI)對

3、其干預(yù)效果。
　　方法:
　　1、實(shí)驗(yàn)動(dòng)物分組:將健康成年雄性SD大鼠（河北醫(yī)科大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供體重250-300g，證書編號:1411023）240只，應(yīng)用隨機(jī)數(shù)表，根據(jù)隨機(jī)區(qū)組設(shè)計(jì)法將其中的240只平均分成四組，空白對照組，高壓電擊組、治療組1（烏司他丁組）、治療組2（己酮可可堿組），每組60只。再在每組中隨機(jī)分為電前15min(T0)、電后15min(T1)、電后1h(T2)、電后2h(T3)、電后4h(T4)、電

4、后8h(T5)，6個(gè)不同時(shí)相組，每組10只。各組分別編號，分籠飼養(yǎng)。
　　2、實(shí)驗(yàn)前準(zhǔn)備:按實(shí)驗(yàn)要求，配置所需藥品，將大鼠稱重、標(biāo)號，按順序記錄數(shù)據(jù)。
　　3、高壓電燒傷大鼠模型制備:連接好實(shí)驗(yàn)設(shè)備，待用。用水合氯醛(0.3ml/100g)腹腔注射麻醉大鼠，麻醉成功后，將大鼠仰臥于電擊實(shí)驗(yàn)臺上，左上肢及右下肢分別連接1cm×1cm電極片，左上肢為入口，右下肢為出口。連接電源，調(diào)整電壓為2kV，閉合實(shí)驗(yàn)儀器回路，使大鼠經(jīng)受高壓

5、電擊3s。按照實(shí)驗(yàn)要求，空白對照組只連電極片，給與假電，及生理鹽水5ml/kg;高壓電擊組電后給與生理鹽水5ml/kg;治療組1電后給與UTI，2萬單位/kg;治療組2電后給與1％PTX，5ml/kg。以上各組分別按時(shí)相取血，制備血清。
　　4、標(biāo)本采集與保存:按照時(shí)相，將高壓電燒傷大鼠麻醉(水合氯醛0.3ml/100g)、固定于動(dòng)物手術(shù)臺上、開胸、直視下心尖取血（3ml粉頭促凝管）。每只大鼠收集約6ml全血，靜置約30min，待

6、血清析出后，用離心機(jī)以3000轉(zhuǎn)/min離心約10min，取上層血清，置于2mlEppendorf管中，保存于-70℃冰箱中，待檢。
　　5、指標(biāo)檢測:采用ELISA雙抗夾心法，分別檢測五組大鼠六個(gè)時(shí)相血清血小板膜糖蛋白GPⅠa/Ⅱa及GPⅣ的表達(dá)量的OD值，根據(jù)試劑盒說明將OD值換算成濃度值。
　　6、實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)處理:采用SPSS13.0統(tǒng)計(jì)軟件對所得數(shù)據(jù)進(jìn)行分析整理。實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)均采用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（x±s）表示。采用兩因素析因

7、設(shè)計(jì)的方差分析，多重比較采用LSD-t檢驗(yàn)，設(shè)定P＜0.05為顯著性差異。
　　結(jié)果:
　　1、血清GPⅠa/Ⅱa變化
　　1.1電傷組大鼠血清GPⅠa/Ⅱa總體含量高于空白對照組(P＜0.01)，且GPⅠa/Ⅱa含量隨傷后時(shí)間變化具有顯著差異(P＜0.01)，呈先增高后降低趨勢，在傷后2h達(dá)到高峰，隨后下降，但在8h時(shí)仍高于空白對照組(P＜0.01)。
　　1.2烏司他丁組大鼠血清GPⅠa/Ⅱa總體含量低于電傷

8、組(P＜0.01)，且烏司他丁組GPⅠa/Ⅱa含量在電傷后逐漸升高，在傷后2h達(dá)到高峰，以后逐漸下降，傷后15min～8h均低于電傷組，有顯著差別(P＜0.05)。
　　1.3己酮可可堿組大鼠血清GPⅠa/Ⅱa含量總體低于電傷組(P＜0.01)，且己酮可可堿血清GPⅠa/Ⅱa含量在電傷后變化較為復(fù)雜。電傷后15min～8h均低于電傷組，有顯著差別(P＜0.05)。
　　2、血漿GPⅣ變化
　　2.1電傷組大鼠血清 GP

9、Ⅳ總體含量高于空白對照組(P＜0.01)，且GPⅣ含量隨傷后時(shí)間變化具有顯著差異(P＜0.01)，呈先增高后降低趨勢，在傷后2h達(dá)到高峰，隨后下降，但在傷后8h時(shí)仍高于空白對照組(P＜0.01)。
　　2.2烏司他丁組大鼠血清 GPⅣ總體含量低于高壓電傷組(P＜0.01)，且烏司他丁組GPⅣ含量在電傷后逐漸升高，在傷后2h達(dá)到高峰，以后逐漸下降。電傷后15min～8h均低于電傷組，有顯著差別(P＜0.01)。
　　2.3己酮

10、可可堿組大鼠血清 GPⅣ含量總體低于電傷組(P＜0.01)，且己酮可可堿組血清GPⅣ含量在電傷后變化較為復(fù)雜。傷后15min～傷后2h低于電傷組(P＜0.01)，有顯著差異，在傷后4h與電傷組無顯著差異(P＜0.05)，在傷后8h低于電傷組，有顯著差異(P＜0.05)。
　　結(jié)論:
　　1、高壓電燒傷后血清GPⅠa/Ⅱa和GPⅣ均有不同程度增高，證明高壓燒傷可引起血小板活化，促進(jìn)血栓形成，使機(jī)體處于高凝狀態(tài)。
　　2、