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文檔簡介
1、染色體結構的維持和功能的發(fā)揮是貫穿生物體生存發(fā)育過程的核心事件之一。從原核生物到人類都存在有一類SMC分子(Structural Maintenance of Chromosomes)參與染色體高級結構動態(tài)變化的多個方面,在真核生物中,至少存在6種SMC分子,并且形成三種不同功能的異源二聚體蛋白復合物。與Cohesin和Condensin的功能有所不同,SMC5/6蛋白復合物的功能主要參與DNA損傷修復過程及基因組穩(wěn)定性的維持,但對其具
2、體作用機制知之甚少。在本實驗室以往的研究中,曾對果蠅基因dnse4進行研究分析,證明其與推定的SMC5/6蛋白復合物成員有物理上的相互作用,同時發(fā)現(xiàn)其與果蠅p53具有物理水平和遺傳學水平上的相互作用,但其作用機制仍不明晰。
本文對該基因及dsmc6基因進行了分析,希望對理解果蠅SMC5/6蛋白復合物的功能有所啟迪。dnse4激活dp53介導的轉錄作用。本實驗室前期鑒定了dnse4的蛋白序列保守性,并且驗證了dnse4編碼蛋
3、白與果蠅SMC5的直接物理結合作用,證明其為SMC5/6蛋白復合物的必要組分。我們利用體外培養(yǎng)的果蠅Kc細胞及p53報告基因系統(tǒng),對dnse4參與dp53轉錄過程的相關性進行了探索。通過對dnse4基因的過表達和RNAi,證明了其對于dp53轉錄激活作用的影響。同時利用離子輻射處理的細胞模型,驗證了dnse4的功能缺失影響了正常dp53功能的發(fā)揮,dnse4能夠激活dp53介導的轉錄激活作用。dsmc6參與dp53依賴的細胞凋亡途徑。根
4、據已發(fā)表文獻中的結果,我們推論SMC5/6成員主要依靠形成蛋白復合物發(fā)揮其生物學功能,通過生物信息學分析,我們認為果蠅CG5524基因為酵母中smc6基因在果蠅中的同源物,將其命名為dsmc6。接下來我們通過P因子非精確剪接的方法制備了其突變體果蠅,此株果蠅包括起始密碼子在內的前四個外顯子被刪除,我們將其命名為dsmc6Δ3。同時,我們利用離子輻射造成的DNA損傷模型研究了dsmc6對dp53依賴的凋亡誘導和dp53依賴的轉錄激活功能的
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