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文檔簡介
1、水母是廣泛分布在全球各海域的無脊椎浮游動(dòng)物。近年來,海洋水溫升高、海水富營養(yǎng)化等多種因素造成某些海域中特定種系水母暴發(fā)。多數(shù)種類水母無明顯毒性作用,少數(shù)種類水母的刺絲囊中攜帶有毒性很強(qiáng)的毒液,其刺絲囊因化學(xué)或機(jī)械刺激發(fā)射刺絲釋放毒素可以造成人員的嚴(yán)重蜇傷。全球每年被水母蜇傷的患者數(shù)以十萬計(jì),其中致死病例也并不罕見。不同種類水母蜇傷的癥狀和體征有所不同,有些水母蜇傷只造成一過性刺痛或輕微紅腫,而有些水母蜇傷較嚴(yán)重,患者出現(xiàn)持續(xù)性疼痛,蕁麻
2、疹和水皰,表皮壞死,循環(huán)系統(tǒng)損傷,多器官功能障礙,甚至死亡。針對水母蜇傷預(yù)防和治療藥物的研究越來越受到關(guān)注,取得了一些進(jìn)展,但尚沒有達(dá)成救治措施方面的廣泛共識(shí)。水母毒素成分復(fù)雜,易粘附和失活,毒作用靶點(diǎn)多樣,毒素的這些理化特點(diǎn)增加了尋找特效抗毒藥物的難度。本文第一部分在細(xì)胞水平和整體動(dòng)物水平分析了低分子右旋糖酐(Dextran-40)對致命性水母蜇傷的保護(hù)作用。第二部分著重分析了5種金屬陽離子對水母毒素溶血作用的干預(yù)效應(yīng)。
實(shí)
3、驗(yàn)方法:
第一部分:Dextran-40對致命性水母蜇傷的保護(hù)作用
本部分研究首先應(yīng)用激光掃描共聚焦顯微鏡,在細(xì)胞水平研究Dextran-40對發(fā)形霞水母Cyanea capillata觸手提取物(tentacle extract,TE)造成的小鼠心室肌細(xì)胞和紅細(xì)胞損傷的保護(hù)作用。然后,應(yīng)用本課題組建立的致命性水母蜇傷綜合征(acutejellyfish envenomation syndrome,AJES和dela
4、yed jellyfish envenomation syndrome,DJES)模型,在整體動(dòng)物水平分別研究Dextran-40對AJES小鼠模型生存率的影響、Dextran-40對AJES大鼠模型循環(huán)功能的影響以及Dextran-40對DJES大鼠模型血生化指標(biāo)的影響。
第二部分:金屬陽離子對水母毒素溶血作用的干預(yù)效應(yīng)
本部分研究首先應(yīng)用分光光度計(jì)法檢測TE的溶血效應(yīng),觀察5種據(jù)報(bào)道具有潛在抗溶血效應(yīng)的陽離子(L
5、a3+,Mn2+,Zn2+,Cu2+和Fe2+)對TE溶血作用的影響,然后,分別測定陽離子溶液的吸光度值、陽離子對紅細(xì)胞懸液的吸光度值影響、陽離子對血紅蛋白溶液的吸光度值影響,并且在顯微鏡下對紅細(xì)胞直接計(jì)數(shù)。綜合分析La3+,Mn2+,Zn2+,Cu2+和Fe2+對水母毒素溶血作用的干預(yù)效應(yīng)。
實(shí)驗(yàn)結(jié)果:
第一部分:Dextran-40對致命性水母蜇傷的保護(hù)作用
本部分實(shí)驗(yàn)結(jié)果發(fā)現(xiàn),TE會(huì)引起心肌細(xì)胞和紅細(xì)
6、胞胞內(nèi)Ca2+含量呈現(xiàn)劑量依賴性增加,心肌細(xì)胞和紅細(xì)胞存活數(shù)量呈現(xiàn)劑量依賴性減少。Dextran-40可以對TE引起的心肌細(xì)胞胞內(nèi)Ca2+含量升高和細(xì)胞存活率降低起到一定的保護(hù)作用;對TE引起的紅細(xì)胞形態(tài)損傷和溶血作用沒有明顯保護(hù)作用,但是顯著抑制TE引起的紅細(xì)胞胞內(nèi)鈣超載。應(yīng)用本課題組建立的致命性水母蜇傷綜合征(AJES和DJES)模型,在整體動(dòng)物水平研究結(jié)果發(fā)現(xiàn),Dextran-40在0.8 g/kg時(shí)能明顯降低TE所致AJES小鼠
7、死亡率。Dextran-40在0.6 g/kg時(shí)能明顯緩解TE所致AJES大鼠的血壓下降,明顯改善TE所致DJES大鼠的肝功能指標(biāo)(ALT,AST,A/G)、心肌損傷相關(guān)酶指標(biāo)(CK,LDH)。
第二部分:金屬陽離子對水母毒素溶血作用的干預(yù)效應(yīng)
本部分實(shí)驗(yàn)結(jié)果發(fā)現(xiàn),有輕微顏色的Zn2+,Cu2+和Fe2+離子溶液導(dǎo)致紅細(xì)胞懸液的吸光度值降低,而Mn2+溶液增加了紅細(xì)胞懸液吸光度值,透明的La3+溶液對紅細(xì)胞懸液的吸光
8、度值幾乎沒有影響,這表明陽離子自身顏色可能干擾紅細(xì)胞懸液中血紅蛋白的吸收光譜。我們測試了5種陽離子對紅細(xì)胞懸浮液釋放的血紅蛋白溶液的影響,表明結(jié)果透明La3+溶液不對血紅蛋白溶液的吸光度值產(chǎn)生明顯影響,Mn2+溶液導(dǎo)致血紅蛋白溶液吸光度值輕微降低,有輕微顏色的Zn2+,Cu2+和Fe2+溶液則顯著降低血紅蛋白溶液的吸光度值。經(jīng)校正分析,除La3+顯示完全抑制TE的溶血作用之外,Zn2+,Cu2+,F(xiàn)e2+和Mn2+使TE溶血曲線右移,即
9、其實(shí)際抑制效應(yīng)比之前報(bào)道的抑制效果偏弱。
實(shí)驗(yàn)結(jié)論:
第一部分:Dextran-40對致命性水母蜇傷的保護(hù)作用
我們推測Dextran-40一方面通過封堵水母毒素在細(xì)胞膜上形成的孔道,對細(xì)胞的鈣超載起到了抑制作用,從而保護(hù)心肌細(xì)胞;另一方面可能通過提高血漿膠體滲透壓,吸收血管外水分而增加血容量,穩(wěn)定血壓,以拮抗水母毒素引起冠脈痙攣導(dǎo)致的機(jī)體低血壓癥及其他心臟病變。
第二部分:金屬陽離子對水母毒素溶
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