鈷離子對斑馬魚胚胎及側(cè)線毛細(xì)胞的毒性作用研究.pdf

1、背景:金屬對金屬髖關(guān)節(jié)置換術(shù)在臨床上得到廣泛的應(yīng)用。金屬關(guān)節(jié)假體植入后患者血中金屬離子濃度明顯升高，部分患者出現(xiàn)一系列的全身癥狀，且有研究表明金屬離子能通過胎盤進(jìn)入胎兒體內(nèi)。
　　目的:觀察鈷離子對斑馬魚胚胎及斑馬魚側(cè)線毛細(xì)胞是否有毒性作用。
　　方法:①將1hpf的斑馬魚胚胎予不同濃度的鈷離子處理6天，觀察胚胎的存活率和生長發(fā)育情況;檢測胚胎的脂質(zhì)過氧化反應(yīng)水平;檢測與氧化應(yīng)激和凋亡相關(guān)基因的表達(dá)情況;TUNEL檢測胚胎異

2、常凋亡信號。②將5dpf的斑馬魚予不同濃度的鈷離子處理，用活性熒光染料標(biāo)記和在體成像技術(shù)觀察側(cè)線毛細(xì)胞的形態(tài)變化;用機(jī)械刺激的方法觀察側(cè)線系統(tǒng)介導(dǎo)的向流性行為和逃跑反應(yīng)是否發(fā)生改變;H2DCFDA檢測毛細(xì)胞內(nèi)ROS水平;TUNEL檢測神經(jīng)丘中凋亡毛細(xì)胞。
　　結(jié)果:①100μg/L以上鈷離子處理導(dǎo)致斑馬魚胚胎發(fā)生一系列發(fā)育異常，如存活率下降、孵出延遲、全身色素降低、不能直立、背部畸形、發(fā)育遲緩、心率減少等;②胚胎脂質(zhì)過氧化反應(yīng)產(chǎn)物

3、MDA增加，抗氧化酶Cat和SOD2表達(dá)升高;③與凋亡相關(guān)基因caspase-9/3和p53表達(dá)增加，胚胎全身異常凋亡信號增加;④300μg/L以上鈷離子處理導(dǎo)致斑馬魚側(cè)線毛細(xì)胞死亡，具有濃度依賴性;⑤30mg/L鈷離子處理引起向流性行為評分和探針反應(yīng)評分降低;⑥培養(yǎng)液中鈣離子對側(cè)線毛細(xì)胞死亡具有調(diào)節(jié)作用，即高濃度鈣離子能減輕鈷離子引起的毛細(xì)胞死亡，而低濃度鈣離子則促進(jìn)毛細(xì)胞死亡;⑦Amiloride和抗氧化劑能減輕鈷離子對側(cè)線毛細(xì)胞的