MXC,BPA聯(lián)合暴露對斑馬魚胚胎及精子活性的毒性研究.pdf

1、甲氧滴滴涕(Methoxychlor,MXC)和雙酚A(Bisphenol-A，BPA)廣泛應用于工業(yè)和生活領域中，己經(jīng)對環(huán)境和人類健康構成了嚴重的威脅，近年來備受人們關注。MXC和BPA具有難降解性、生物蓄積性和沿食物鏈在生物體內(nèi)富集作用，已經(jīng)成為一種新型的持久性有機環(huán)境污染物。目前對MXC與BPA的毒性研究尚不全面，特別是在水生生物中的研究相對較少，且MXC與BPA復合染毒在斑馬魚胚胎發(fā)育中的毒性和生殖系統(tǒng)的毒性研究在國內(nèi)外還未見報

2、導。
　　 本文以斑馬魚胚胎為實驗材料，優(yōu)化了利用斑馬魚胚胎檢測化合物毒性的實驗方法，并以MXC，BPA單一染毒為研究對象，進行了急性毒性實驗。結果表明，自6hpf染毒至96hpf,MXC與BPA單一染毒的半數(shù)致死濃度(LC50)分別為24.32μmol·L-1和44.93μmol·L-1。
　　 1.0μmol·L-1的MXC提早了斑馬魚胚胎48hpf時的孵化；而BPA暴露后，胚胎在48hpf時不孵化，在72hpf時才

3、孵化，且高濃度的BPA抑制其孵化；當1.0μmol·L-1的MXC和不同濃度的BPA復合染毒時，胚胎的孵化情況與BPA單獨染毒時類似。MXC對72hpf幼魚主要的致畸效應為脊柱彎曲，主要表現(xiàn)為脊柱側凸和脊柱后凸：BPA單一暴露，低劑量的MXC與BPA復合暴露對幼魚不會造成畸形的現(xiàn)象。
　　 在1.0μmol·L-1的MXC濃度下，都不引起孵化率的差異和胚胎畸形的出現(xiàn)，而5.0μmol·L-1的MXC對胚胎的孵化具有毒性效應，能產(chǎn)

4、生胚胎的畸形。所以在本次實驗中我們認為，1.0μmol·L-1的MXC對斑馬魚的胚胎是未觀察到損害作用的劑量（no-observedadverseeffectlevel，NOAEL），5.0μmol·L-1的MXC對斑馬魚的胚胎是觀察到損害作用的最低劑量(lowestobservedadverseeffectlevel，LOAEL)。
　　 利用吖啶橙染色技術檢測24hpf胚胎內(nèi)細胞凋亡，結果顯示在胚胎的腦部、眼睛、腹部、卵黃囊

5、和尾部出現(xiàn)大量的細胞凋亡。
　　 行為學研究中的基本活力測試結果表明，胚胎自6hpf染毒至120hpf后脫毒的斑馬魚幼魚，MXC可以使幼魚的游泳速度減慢，游泳距離變短，而BPA單一暴露，MXC與BPA復合暴露對幼魚的游泳速度與游泳距離未見毒性效應。這些結果說明MXC在斑馬魚胚胎中有發(fā)育和潛在的神經(jīng)毒性。
　　 最后，本實驗還研究了MXC，BPA單一暴露以及復合暴露后斑馬魚精子活力的變化。結果發(fā)現(xiàn)經(jīng)過MXC，BPA及其復合

6、暴毒之后的成年雄性斑馬魚，其體長，體重和精巢重與對照組相比，并沒有發(fā)生明顯的變化。但是經(jīng)過MXC，BPA單一暴露以及復合暴露后，運用計算機輔助精液分析儀(ComputerAssistedSpermAnalysis，CASA)來檢測精子的活力，發(fā)現(xiàn)其精子活力與正常對照組和DMSO溶劑對照組相比有一定程度的下降，且差異顯著。實驗中沒有采用卵黃蛋白原(Vtg)作為實驗指標，而采用了精子活力作為環(huán)境雌激素污染物暴露后的生物標志物，操作步驟簡單，