廣藿香油對UV所致小鼠皮膚光老化模型保護作用的實驗研究.pdf

1、目的:
　　光老化是皮膚過早老化的過程，是由于皮膚持續(xù)地長時間暴露于紫外線輻射所產(chǎn)生，并以曬斑，粗皺紋，失去彈性和光化性角化病為臨床特征。光老化可導(dǎo)致嚴重后果，其與多種皮膚病甚至于皮膚腫瘤的發(fā)生息息相關(guān)，約80％以上的暴露部位美容問題均由皮膚光老化引起。中醫(yī)認為皮膚光老化以外熱侵襲為主要病因，以痰濁阻滯為重要病機，可采用活血通絡(luò)化瘀祛濁法進行治療。過去幾十年來，國內(nèi)外研究者對皮膚光老化進行了廣泛的研究。筆者通過查閱大量文獻繪制出皮

2、膚光老化發(fā)生的分子機制圖，得知皮膚光老化的發(fā)生機制與氧化應(yīng)激和炎癥因子有關(guān)。
　　廣藿香是我國常用的芳香化濕中藥之一，具有芳香化濁、和中止嘔、發(fā)表解暑的功效，不僅用于治療濕滯中阻、脘痞嘔吐等，還被作為古代面部美容方劑的常用中藥用于治療面部疾病。廣藿香油是廣藿香經(jīng)過水蒸氣蒸餾提取得到的揮發(fā)油，是廣藿香的主要藥用部分，其因具有本草特征及穩(wěn)定屬性已經(jīng)成為化妝品中最重要的成分之一。廣藿香油含有多種生物活性成分，表現(xiàn)出抗過敏、抗菌等皮膚活性

3、及抗氧化和抗炎活性。其中抗氧化和抗炎活性的作用路徑均與抗皮膚光老化活性有關(guān)。那么其用于面部美容，是否與抗皮膚光老化活性有關(guān)呢？廣藿香油是否具有抗皮膚光老化活性呢？若具有抗皮膚光老化活性，又是通過何種機制起作用呢？是否與其芳香化濁、發(fā)表解暑的功效有關(guān)？
　　因此，本文選擇廣藿香油為研究對象，探討其對紫外線所致小鼠皮膚光老化模型的保護作用，并從皮膚組織病理學(xué)及氧化應(yīng)激損傷機制探討其抗皮膚光老化作用的可能機理，并從分子機制探討廣藿香油發(fā)

4、揮“芳香化濁，發(fā)表解暑”之功拮抗皮膚光老化的現(xiàn)代科學(xué)內(nèi)涵。
　　方法與結(jié)果:
　　1.廣藿香油的化學(xué)成分研究
　　采用GC法測定廣藿香油中主要化學(xué)成分指標(biāo)廣藿香醇的含量，并采用GC-MS法測定廣藿香油的化學(xué)組成成分。測得廣藿香醇的含量為28.2％(g/g)，符合中國藥典不低于26％的要求;廣藿香油中共鑒別出18種化學(xué)成分，占揮發(fā)油總成分的88.3％。主要由萜類成分組成，其中單帖和倍半萜占超過50％，廣藿香醇占29.3％

5、（峰面積百分比）。通過定性鑒別和定量分析，可確保用于藥效學(xué)試驗的樣品質(zhì)量。
　　2.廣藿香油對UV所致小鼠皮膚光老化模型的保護作用研究
　　以KM種小鼠作為實驗動物，分為NC、SC、MC、VC、PO-L、PO-H、PO-M、PO-H等七組，每組9只。采用UVA和UVB同時照射小鼠，制備光老化模型。以廣藿香油局部涂抹的預(yù)給藥方式，考察其對皮膚光老化模型的保護作用。實驗中，將小鼠背部局部毛發(fā)去除使皮膚裸露，用廣藿香油處理2小時后

6、于紫外燈下照射。通過宏觀評分、提皮試驗，以宏觀評分值及皮膚恢復(fù)時間為指標(biāo)，探討其對UV所致小鼠皮膚光老化模型的保護作用。宏觀評分結(jié)果:PO-H組給藥六周后顯現(xiàn)出可抑制UV誘導(dǎo)的廣泛紅斑和深皺紋的趨勢;PO-M組給藥八周后顯示出對皮膚皺紋形成具有抑制作用;實驗結(jié)束時，PO-H組和PO-M組分數(shù)明顯低于VC組，提示PO局部給藥可抑制UV誘導(dǎo)的皮膚表觀損傷。皮膚彈性試驗結(jié)果:與VC組比較PO-L組無顯著差異，PO-M、PO-H組均顯著減少皮膚

7、恢復(fù)時間;結(jié)果表明，廣藿香油局部給藥（特別是6mg/只和9mg/只）可促進皮膚彈性。宏觀評分及提皮試驗結(jié)果共同提示，廣藿香油局部給藥對UV所致小鼠皮膚光老化模型具有顯著的保護作用。
　　3.基于皮膚病理學(xué)及氧化應(yīng)激損傷機制探討廣藿香抗皮膚光老化的作用機理采用HE染色法與Gomori's醛品紅染色法觀察廣藿香對光老化皮膚組織結(jié)構(gòu)的影響，通過觀察皮膚角質(zhì)層和表皮厚度變化，膠原纖維及彈性纖維的形態(tài)、含量及分布，總體評價廣藿香油對光老化皮

8、膚組織結(jié)構(gòu)的影響。表皮厚度測定結(jié)果:PO-M和PO-H組可見表皮厚度顯著減小，分別減少19.8μm和23.7μm;結(jié)果提示PO-M、PO-H組均可顯著減輕UV誘導(dǎo)的表皮增生。組織特征觀察結(jié)果:廣藿香油局部給藥可改善UV照射引起的皮膚結(jié)構(gòu)改變，如表皮異常增厚;表皮真皮連接處扁平化，表皮突與真皮乳頭消失;膠原纖維斷裂、減少、排列紊亂;彈性纖維變性斷裂;提示廣藿香油可抑制UV照射引起的異常組織改變。
　　基于氧化應(yīng)激損傷機制，采用生化指

9、標(biāo)測定方法考察廣藿香油對光老化皮膚中膠原蛋白與丙二醛(MDA)含量的影響，對光老化皮膚中對超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽過氧化物酶(GSH-Px)、過氧化氫酶(CAT)等活性的影響。實驗結(jié)果，PO-M和PO-H組均可顯著提高膠原蛋白含量分別達21.9％和26.3％，顯著降低光老化皮膚的MDA含量，顯著增加SOD、GSH-Px活力。PO-L組與PO-H組顯著增加CAT活力分別為29.8％和90.7％，PO-M組未對CAT活力有顯著影響

10、。結(jié)果提示廣藿香油可減輕UV誘導(dǎo)的膠原蛋白損壞，抑制UV照射小鼠引起的脂質(zhì)過氧化反應(yīng)，減輕UV照射引起的SOD、GSH-Px、CAT活力降低。
　　4.探討廣藿香發(fā)揮“芳香化濁，發(fā)表解暑”之功拮抗皮膚光老化的現(xiàn)代科學(xué)內(nèi)涵
　　結(jié)合分子機制和中醫(yī)理論進行探討:UV照射屬“外熱”，ROS屬“痰濁”，UV照射引起皮膚光老化即為“外熱侵襲所致皮膚衰老”，ROS損傷引起皮膚細胞功能障礙即為“痰濁阻滯引起皮膚氣血運行失?！薄V藿香油抑制

11、UV照射引起的皮膚異常結(jié)構(gòu)改變，即為“發(fā)表解暑”，而廣藿香油具有芳香屬性并能抑制ROS損傷即為“芳香化濁”。因此，廣藿香油發(fā)揮“芳香化濁，發(fā)表解暑”之功，而起抗皮膚光老化作用。
　　結(jié)論:
　　根據(jù)酶促抗氧化防御系統(tǒng)可調(diào)節(jié)ROS清除自由基的理解，抗氧化劑治療被認為是抗皮膚光老化的有效方法。廣藿香油作為一種抗氧化劑，局部給藥對UV所致小鼠皮膚光老化模型具有顯著的保護作用。這種保護作用可能通過減輕表皮增生，抑制皮膚組織結(jié)構(gòu)異常改