EGCG對(duì)急性UVB輻射后表皮角質(zhì)形成細(xì)胞的保護(hù)機(jī)制探討及對(duì)慢性UVA輻射后小鼠皮膚光老化的防護(hù)作用.pdf

1、EGCG對(duì)急性UVB照射HaCaT細(xì)胞保護(hù)機(jī)制的探討研究背景： 日光中的長(zhǎng)波紫外線(UVA)和中波紫外線(UVB)輻射可引起急性損傷如日曬傷和慢性累積性損傷如光老化及皮膚癌，對(duì)人類健康構(gòu)成潛在危害。波長(zhǎng)短能量較高的UVB(290-320nm)主要作用于表皮，角質(zhì)形成細(xì)胞是其靶細(xì)胞，可誘導(dǎo)皮膚不良反應(yīng)如紅斑、水腫、水皰、皮膚色素沉著、異常增生、光老化和非黑色素皮膚癌，而機(jī)體通過(guò)多種保護(hù)性措施如凋亡和炎癥來(lái)保護(hù)皮膚監(jiān)視及對(duì)抗?jié)撛谥掳?/p>

2、細(xì)胞的增殖。 近幾年紫外線誘導(dǎo)的炎癥反應(yīng)和細(xì)胞惡性轉(zhuǎn)化過(guò)程中信號(hào)通路的作用受到廣泛關(guān)注，其中一個(gè)研究熱點(diǎn)即是絲裂原活化蛋白激酶(MAPK)信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路，該途徑可被紫外線激活，故在調(diào)節(jié)紫外線誘導(dǎo)的多重細(xì)胞反應(yīng)中至關(guān)重要。MAPK主要由以下四個(gè)家族組成：ERK,JNK,p38和ERK5/BMK1，其中p38介導(dǎo)的炎癥反應(yīng)和凋亡在維護(hù)表皮完整性和對(duì)抗紫外線誘導(dǎo)的腫瘤效應(yīng)方面具有重要作用。 綠茶是全球廣泛受歡迎的飲料，綠茶中的酚

3、類是兒茶素，其中的沒(méi)食子兒茶素沒(méi)食子酸酯(EGCG)是有效的自由基清除劑和抗氧化劑，可以預(yù)防化學(xué)致癌作用和紫外線誘導(dǎo)的氧化應(yīng)激效應(yīng)。我們以前的研究證實(shí)單次UVB輻射可引起急性光損傷包括細(xì)胞活性減低及增殖減慢、細(xì)胞凋亡增加、光加合物形成增多。累積性UVA/UVB照射甚至可以導(dǎo)致DNA突變及皮膚癌發(fā)生，當(dāng)加入EGCG干預(yù)后，均可以減少UVB照射所致上述各種損傷性改變，但關(guān)于p38絲裂原活化蛋白激酶(p38MAPK)信號(hào)途徑在UVB所致凋亡及

4、炎癥中的作用，及其EGCG的保護(hù)機(jī)制是否也與此途徑有關(guān)在國(guó)內(nèi)尚未見報(bào)告，因此我們以人皮膚角質(zhì)形成細(xì)胞株HaCaT為觀察對(duì)象，研究p38MAPK途徑在UVB照射誘導(dǎo)的細(xì)胞凋亡及炎癥介質(zhì)分泌活動(dòng)中的作用，并以p38抑制劑為陽(yáng)性參照對(duì)比觀察EGCG的干預(yù)保護(hù)作用是否也與p38MAPK通路有關(guān)。 目的：第一部分研究UVB輻射引起HaCaT細(xì)胞發(fā)生凋亡的概率、細(xì)胞因子TNF-α、IL-1β及IL-6的分泌及p38MAPK和磷化p38絲裂原

5、活化蛋白激酶(p-p38MAPK)的表達(dá)，探討凋亡、細(xì)胞因子分泌與p38MAPK之間的聯(lián)系，確定p38MAPK信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑是否參與了UVB誘導(dǎo)的細(xì)胞凋亡及細(xì)胞因子的分泌。第二部分研究EGCG對(duì)UVB輻射后細(xì)胞凋亡、細(xì)胞因子分泌及p38MAPK、p-p38MAPK表達(dá)的影響，探討EGCG的光保護(hù)機(jī)制是否也與p38MAPK通路有關(guān)。 方法：使用0,20，30，40，60，70及90mJ/cm2UVB照射HaCaT細(xì)胞，照射后0h，1

6、h，2h，3h，4h，6h，24h及48h收集細(xì)胞和上清。流式細(xì)胞儀檢測(cè)細(xì)胞周期和凋亡；ELISA檢測(cè)上清液中TNF-α、IL-1β、IL-6水平；WestemBlot方法檢測(cè)p38MAPK和p-p38MAPK的表達(dá)。 結(jié)果：①與空白對(duì)照組細(xì)胞凋亡率(O)相比，30mJ/cm2UVB照射后24h，HaCaT細(xì)胞凋亡率為21.25±0.33％，應(yīng)用p38抑制劑后測(cè)細(xì)胞凋亡率降為10.14±0.27％，較UVB組降低1/2。②30m

7、J/cm2UVB照射HaCaT細(xì)胞，照射后HacaT細(xì)胞分泌TNF-α漸增加，24h達(dá)高峰，后漸下降，p38抑制劑SB203580完全抑制TNF-α的分泌。UVB輻射后IL-1β，IL-6則隨孵育時(shí)間而大幅度增加，SB203580明顯抑制了IL-1β和IL-6的分泌水平。③不同劑量UVB照射后可激活HaCaT細(xì)胞p38MAPK途徑，磷酸化p-p38水平增高，照光組與非照光組間相比具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。以30mJ/cm2UVB照射時(shí)p-p38表

8、達(dá)量最高，但非磷酸化p38表達(dá)量沒(méi)有類似明顯變化。以上數(shù)據(jù)說(shuō)明急性UVB照射后p38MAPK途徑的激活、細(xì)胞因子的分泌及凋亡細(xì)胞的增加之間存在時(shí)間先后上的調(diào)控關(guān)系，即p38MAPK信號(hào)通路中p38的快速磷酸化參與調(diào)控了后續(xù)的細(xì)胞因子的分泌活動(dòng)及其由炎癥介質(zhì)介導(dǎo)的細(xì)胞凋亡作用。另外本實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示p38抑制劑不能抑制UVB對(duì)p38磷酸化的誘導(dǎo)作用。④應(yīng)用EGCG后細(xì)胞凋亡率降為6.63±7.5％，同時(shí)加入EGCG能部分抑制p-p38MAPK