氟非尼酮對(duì)UVA誘導(dǎo)的光老化保護(hù)作用及其機(jī)制研究.pdf

1、目的:
　　探討氟非尼酮（Fluorofenidone，AKF-PD）在UVA誘導(dǎo)的人皮膚成纖維細(xì)胞（Human skin fibroblasts，HSF）衰老和小鼠皮膚光老化中的保護(hù)作用，及其可能分子機(jī)制。
　　方法:
　　1.培養(yǎng)原代人皮膚成纖維細(xì)胞，MTT比色法測定AKF-PD對(duì)UVA誘導(dǎo)HSF增殖抑制的影響。
　　2.不同濃度的AKF-FD（0，50，100，150μM）處理UVA照射（10J/cm2*3

2、d）后的HSF，最后一次照光結(jié)束后24hr，分別用β-半乳糖苷酶染色試劑盒檢測衰老相關(guān)β-半乳糖苷酶活性，免疫印跡法(western-blot)檢測sirt1、磷酸化mTOR和衰老相關(guān)蛋白p16的表達(dá)，以及RT-PCR檢測sirt1的轉(zhuǎn)錄水平。
　　3.每次UVA照射后，用mTOR(mammalian target of rapamycin)抑制劑雷帕霉素（rapamycin，RP）(50nM)預(yù)處理HSF1hr后，再加AKF-P

3、D孵育細(xì)胞。最后一次照光結(jié)束后24hr，分別通過qPCR檢測sirt1轉(zhuǎn)錄水平和western blot測定sirt1的翻譯水平。
　　4.動(dòng)物實(shí)驗(yàn):選取8周大小Fvb雌性小鼠，背部皮膚脫毛后測得小鼠的最小紅斑量（minimum erythermal dose，MED）。由1MED開始，每周照射3次，每隔兩周增加一次UVA照射劑量，在照射劑量達(dá)15J/cm2后維持不變，共12周。對(duì)照組小鼠不做任何處理，實(shí)驗(yàn)組和基質(zhì)對(duì)照組小鼠局部皮

4、膚每天擦拭2％AKF-PD凝膠或基質(zhì)凝膠，照光時(shí)，在UVA照射后1hr擦藥。12周后，觀察小鼠背部皮膚改變，并取皮膚組織行HE染色，觀察表皮厚度的變化。
　　結(jié)果:
　　1.AKF-PD可以逆轉(zhuǎn)由UVA誘導(dǎo)的HSF增殖抑制，β-半乳糖苷酶染色率(p＜0.05）和P16表達(dá)的增加，并呈劑量依賴性。
　　2.AKF-PD能抑制UVA照射HSF導(dǎo)致的sirt1表達(dá)下降和mTOR磷酸化水平的升高，這種變化趨勢也是呈劑量依賴性的

5、(p＜0.05）。
　　3.RP能加強(qiáng)AKF-PD上調(diào)UVA照射后HSF中sirt1水平的作用(p＜0.05)。
　　4.UVA照射后小鼠背部皮膚有明顯的皺紋形成，表皮厚度增加，2％AKF-PD凝膠能明顯改善上述皮膚光老化的表型（p＜0.05）。
　　結(jié)論:
　　1.AKF-PD可以通過抑制mTOR促進(jìn)sirt1的增加，從而延緩人皮膚成纖維細(xì)胞的衰老。
　　2.2％AKF-PD凝膠能顯著改善小鼠光老化皮膚的