吡非尼酮對實驗性大鼠肝纖維化的作用研究.pdf

1、研究背景及目的：肝纖維化（HF）是繼發(fā)于各種原因引起的肝臟炎癥或損傷后組織修復過程中的代償反應，以細胞外基質（ECM）特別是膠原在肝內過量沉積為病理特征。許多慢性肝臟疾病都會發(fā)生HF。如果HF得不到有效控制，將會發(fā)展為肝硬化，甚至部分病例會演變?yōu)楦伟＝陙硪恍┭芯匡@示，HF是慢性肝病發(fā)展過程中唯一具有可逆性的中間環(huán)節(jié)，通過正確合理的治療，HF可以減輕，甚至痊愈。但是，目前臨床上仍缺乏公認有理想效果的抗肝纖維化藥物。因此，HF的防治研究

2、在今后一定時期內仍是國內外研究的熱點及難點問題。 吡非尼酮（pirfeudone，PFD）是20世紀70年代合成的小分子化合物。最初研究發(fā)現PFD具有一定的抗炎作用，近年來，發(fā)現它對于組織的纖維化具有抑制作用，越來越多的實驗結果證實了PFD在抗纖維化方面的顯著療效。特別是在特發(fā)性肺纖維化方面，發(fā)現PFD比其他一些常用藥物的臨床療效更好，尚未見明顯不良反應。PFD抗纖維化作用的機制尚處于研究之中，但已有研究證明PFD是一種有效的細

3、胞因子抑制劑，能夠通過參與調節(jié)某些因子，抑制成纖維細胞的生物學活性，導致細胞增殖受抑，基質膠原合成減少。目前發(fā)現PFD作用的靶因子主要有以下幾種：轉化生長因子-β（TGF-β1）、血小板衍化生長因子（PDGF）、腫瘤壞死因子-α（TNF-α）、結締組織生長因子（CTGF）和其他炎癥因子等。 國外對PFD的研發(fā)比較早。1994年美國就有人申請了PFD的抗纖維化作用的專利。PFD的出現可能是纖維化防治的新開端，具有新藥開發(fā)的良好前景

4、。但我國目前對PFD在抗肝纖維化方面的研究開發(fā)尚屬空白。本課題旨在研究PFD在二甲基亞硝胺（dimethylnitrosamine，DMN）誘導的大鼠肝纖維化中的抑制作用，為臨床抗肝纖維化治療提供新的途徑。 方法：45只雄性Wistar大鼠隨機均分為正常組、模型組及干預組。干預組及模型組均腹腔內注射1％DMN（10mg/kg·d，3次/周，共4周）用作HF造模；正常組注射等體積生理鹽水。干預組同時給予PFD灌胃（500 mg/k

5、g，1次/日，共四周）；模型組及正常組則以等量生理鹽水灌胃。4周末麻醉大鼠，取心臟血，稱量肝、脾濕重并收取肝組織；蘇木精-伊紅染色（HE染色）和Masson染色觀察HF的形成；隨機抽取樣本透射電鏡觀察肝細胞、肝星狀細胞、肝竇內皮細胞超微結構改變；酶聯免疫吸附法（ELISA）檢測血清透明質酸（HA）、層粘連蛋白（LN）、Ⅲ型前膠原（PCⅢ）、Ⅳ型膠原（Ⅳ-C）及TGF-β1；全自動生化儀檢測血清谷丙轉氨酶（ALT）、谷草轉氨酶（AST）、

6、總膽紅素（TBIL）和白蛋白（ALB）指標。 結果：①與正常組相比，模型組大鼠體重明顯降低（P<0．05），肝、脾指數均明顯增加（P<0．05）；干預組大鼠體重、肝濕重及肝指數與正常組相比無明顯變化（P>0．05），脾指數明顯增加（P<0．05）。與模型組相比，干預組大鼠體重明顯增加，肝、脾指數均明顯降低（P均<0．05）。②組織病理學觀察，HE染色及Masson染色示正常組大鼠肝小葉結構正常，肝細胞無變性壞死。模型組大鼠肝小葉

7、結構明顯破壞，纖維結締組織增生并向小葉內延伸，假小葉形成，匯管區(qū)炎性浸潤明顯。干預組大鼠肝小葉結構輕度紊亂，匯管區(qū)僅見少量炎性細胞浸潤，無明顯假小葉形成。干預組肝內炎癥活動度分級及纖維化程度分期較模型組明顯改善（P<0．05）。③透射電鏡顯示干預組大鼠肝細胞損傷明顯減輕，細胞器結構尚清晰完整與正常組相似，肝竇及Disse腔內膠原纖維沉積明顯減少。④干預組大鼠血清肝纖維化四項指標（HA145．3±14．12ng/mL、LN97．8±7．2

8、2ng/mL、PCⅢ38．1±4．37 ng/mL和Ⅳ-C52．8±4．62 ng/mL）高于正常組（P均<0．05）；但與模型組（分別為HA178．9±20．46ng/mL、LN124．1±19．82 ng/mL、PCⅢ40．4±3．23 ng/mL、Ⅳ-C82．5±10．56 ng/mL）相比干預組血清肝纖維化四項均明顯降低（P<0．05，P<0．05， P>0．05， P<0．05）。⑤肝功能指標：干預組血清ALT、AST和TBI

9、L與模型組相比明顯降低（P均<0．001），干預組血清ALB和正常組比較無差異（P=0．14），和模型組比較差異明顯（P<0．001）。⑥干預組血清TGF-β1含量較模型組明顯降低（P<0．001）。 結論： 1、PFD可顯著降低實驗性肝纖維化大鼠血清HA、LN及Ⅳ-C水平，改善肝纖維化程度分期； 2、PFD能夠降低轉氨酶及膽紅素水平，降低肝臟炎癥活動度分級，改善肝臟功能； 3、PFD對肝細胞有一定的形態(tài)