黃芩莖葉總黃酮對實(shí)驗(yàn)性大鼠肝纖維化的保護(hù)作用及其機(jī)制的研究.pdf

1、本研究采用四氯化碳(CCL4)制備大鼠肝纖維化模型，觀察黃芩莖葉總黃酮(SSTF)對肝纖維化的保護(hù)作用，并對其抗肝纖維化作用機(jī)制進(jìn)行探討，為黃芩莖葉總黃酮的新藥開發(fā)和應(yīng)用提供確切的實(shí)驗(yàn)與理論依據(jù)。 研究方法： 1.CCL4致肝纖維化模型的復(fù)制雄性SD大鼠20只，隨機(jī)分為模型組(12只)和對照組(8只)，模型組大鼠大腿內(nèi)側(cè)皮下注射40％CCL4色拉油溶液，0.3ml/100g體重，每周2次，共8周，復(fù)制大鼠慢性肝纖維化模型

2、，對照組常規(guī)方法飼養(yǎng)。 2.SSTF對實(shí)驗(yàn)性大鼠肝纖維化保護(hù)作用的實(shí)驗(yàn)分組與指標(biāo)檢測： 2.1.動物分組取雄性SD大鼠60只，隨機(jī)分為5組： ①正常對照組，常規(guī)方法飼養(yǎng)。②CCL4損傷模型組，40％CCL4色拉油溶液0.3ml/100g體重，大腿內(nèi)側(cè)皮下注射，每周2次，共8周。③CCL4損傷+SSTF低、中、高三個劑量保護(hù)組，CCL4損傷處理同②組，于第二次注射CCL4的同時灌胃(ig)給予SSTF17.5、35

3、、70mg/kg，每天一次，連續(xù)8周。各組于造模起第8周末斷頭處死大鼠，留血清和肝組織標(biāo)本進(jìn)行指標(biāo)檢測。 2.2.指標(biāo)檢測： ①比色法測定血清谷丙轉(zhuǎn)氨酶(ALT)活性和白蛋白(Alb)含量。②比色法測定肝勻漿羥脯氨酸(Hyp)含量。③比色法測定肝勻漿丙二醛(MDA)含量,超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽過氧化物酶(GSH-px)活性。④比色法測定肝組織總蛋白含量⑤SABC法觀察肝組織a-平滑肌肌動蛋白(a-SMA)的表

4、達(dá)。⑥H.E染色和V-G膠原纖維特殊染色，光鏡觀察肝組織病理改變和肝纖維化程度。 研究結(jié)果： 1.血清肝功能指標(biāo)的變化。CCL4慢性肝損傷后，血清ALT水平明顯升高，正常組為41.25±4.90U/L，模型組為194.5±4.27U/L；Alb含量明顯降低，正常組為43.05±3.21g/L，模型組為28.95±3.97g/L，與正常組比較，差異有非常顯著意義(p＜0.01)。給予SSTF(17.5、35、70mg/kg

5、)保護(hù)后，血清ALT水平明顯降低，分別為174.17±5.54g/L、149.60±3.51g/L、63.52±4.10g/L，Alb含量明顯升高，分別為30.11±3.03g/L、34.23±1.03g/L、40.13±4.35g/L，與模型組比較，差異有顯著意義(p＜0.01，或p＜0.05)。 2.肝組織纖維化指標(biāo)的變化。CCL4慢性肝損傷后，肝臟Hyp含量明顯升高，正常組為58.01±3.43ug/g肝濕重，模型組為10

6、5.53±5.09ug/g肝濕重，與正常組比較，差異有非常顯著意義(p＜0.01)。給予SSTF(17.5、35、70mg/kg)保護(hù)后，肝臟Hyp含量降低，分別為98.20±4.05ug/g肝濕重、80.71±4.23ug/g肝濕重、62.84±3.46ug/g肝濕重，與模型組比較，差異有顯著意義(p＜0.01，或p＜0.05)。 3.肝組織中MDA含量及SOD、GSH-px活性的變化。CCL4慢性肝損傷后，模型組大鼠肝組織M

7、DA含量顯著升高，正常組為21.47±4.12nmol/mg蛋白，模型組為37.50±2.25nmol/mg蛋白；SOD活性顯著降低，正常組為142.70±5.56NU/mg蛋白，模型組為92.24±5.90NU/mg蛋白；GSH-px活性顯著降低，正常組為70.61±4.88U/mg蛋白，模型組為20.06±4.10U/mg蛋白；與正常組比較差異有非常顯著意義(p＜0.01)。給予SSTF(17.5、35、70mg/kg)保護(hù)后，MD

8、A含量明顯降低，分別為34.31±4.67nmol/mg蛋白、30.12±3.55nmol/mg蛋白、23.74±4.77nmol/mg蛋白；SOD活性明顯升高，分別為119.12±4.19NU/mg蛋白、124.45±4.63NU/mg蛋白、145.31±4.01NU/mg蛋白；GSH-px活性明顯升高，分別為34.92±5.01U/mg蛋白、45.88±5.05U/mg蛋白、62.79±4.28U/mg蛋白；與模型組比較，差異有顯著

9、意義(p＜0.01，或p＜0.05)，且具有明顯的劑量依從性。 4.肝組織a-SMA表達(dá)的變化。 免疫組化結(jié)果顯示：對照組肝組織內(nèi)a-SMA主要表達(dá)于匯管區(qū)動、靜脈壁，模型組a-SMA在匯管區(qū)、纖維間隔及炎癥細(xì)胞浸潤區(qū)均呈陽性表達(dá)，SSTF各保護(hù)組a-SMA表達(dá)較模型組有明顯的減弱，僅在匯管區(qū)有少量表達(dá)。5形態(tài)學(xué)觀察： 肝組織病理切片H.E染色和V-G膠原纖維特殊染色光鏡下觀察結(jié)果顯示：模型組表現(xiàn)為慢性肝纖維化改

10、變，肝細(xì)胞腫脹變性，肝內(nèi)有大量纖維組織增生，交聯(lián)呈網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)，膠原纖維染色呈強(qiáng)陽性，分布與纖維間隔一致，給予SSTF保護(hù)后，肝組織病理改變明顯好轉(zhuǎn)，只有輕度空泡樣和脂肪樣變性，肝纖維組織增生明顯減少，于肝竇和匯管區(qū)可見輕度增生的膠原和網(wǎng)狀纖維，纖維隔基本消失。 上述各項(xiàng)結(jié)果充分顯示：1.CCL4慢性肝損傷后，血清ALT活性明顯升高，Alb含量明顯降低，肝臟Hyp含量明顯升高，a-SMA陽性表達(dá)，肝組織有明顯的病理改變，表明CCL4

11、大鼠肝纖維化模型復(fù)制成功。2.大鼠慢性肝損傷后給予SSTF不同劑量保護(hù)，均可使血清ALT活性明顯降低，Alb含量明顯升高，肝臟Hyp含量明顯降低，a-SMA表達(dá)量明顯減少，且肝組織病理改變明顯好轉(zhuǎn)，提示SSTF對CCL4誘導(dǎo)的肝纖維化有很好的保護(hù)作用；3.SSTF能降低損傷組肝組織MDA含量，提高SOD、GSH-px活性，隨著SOD、GSH-px活性的提高，血清生化指標(biāo)、肝纖維化指標(biāo)、肝組織病理改變和纖維組織增生均有明顯改善，肝組織內(nèi)a

12、-SMA表達(dá)量明顯減少。充分表明SSTF具有較強(qiáng)的抗氧化作用，且對肝纖維化的保護(hù)作用與抗氧化作用密切相關(guān)。 研究結(jié)論： 1.SSTF能明顯改善肝功能，減少肝組織炎癥反應(yīng)，抑制膠原纖維在肝內(nèi)的增生和沉積。表明SSTF對大鼠肝纖維化有較強(qiáng)的保護(hù)作用。 2.SSTF能夠提高內(nèi)源性抗氧化酶SOD、GSH-px的活性，降低脂質(zhì)過氧化產(chǎn)物MDA的含量，具有較強(qiáng)的清除自由基的抗氧化作用，通過抑制氧化應(yīng)激對肝星形細(xì)胞的活化，有效