阿托伐他汀對快速心房起搏兔房顫模型心房重構影響的研究.pdf

1、心房顫動（簡稱房顫）是臨床上最常見的心律失常。它可以引起心力衰竭、腦卒中等多種并發(fā)癥，導致死亡率增加，嚴重影響著患者的壽命和生活質量，增加醫(yī)療支出和社會負擔。目前，房顫的治療方法可以分為“節(jié)律控制”和“室率控制”?！肮?jié)律控制”是指通過藥物復律、電復律或射頻消融手術，轉復并維持竇性心律；“室率控制”則是指通過藥物控制患者靜息及運動時的心室率，減少房顫癥狀，同時給予抗凝治療，預防血栓栓塞并發(fā)癥。近年來，雖然房顫的藥物和射頻消融治療取得了極大

2、的進展，但是針對藥物復律、電復律或房顫射頻消融術后如何進行后續(xù)治療預防房顫復發(fā)，如何更有效抗凝預防房顫相關并發(fā)癥等問題，目前仍缺乏有效解決措施。因此，深入了解房顫的發(fā)病機制，從而探索房顫治療的新方法，仍是臨床亟待解決的問題。
　　房顫發(fā)生和維持的主要病理生理機制是心房重構，包括電重構和結構重構。電重構是指由于心房離子通道功能異常，引起心房有效不應期縮短、心房有效不應期的頻率適應性降低、傳導不均一性增高等；結構重構主要表現為心房擴張

3、和間質纖維化。越來越多的研究表明，炎癥和氧化應激在房顫中發(fā)揮重要作用。一方面，炎癥促進心房的電重構和結構重構，從而導致房顫的發(fā)生；另一方面，房顫可以引起心房重構和炎癥反應的進一步加重，從而促進房顫的維持，即所謂的“房顫導致房顫”。因此，抗炎和抗氧化應激治療可能成為房顫治療的新方法。
　　他汀類藥物，即羥甲基戊二酰輔酶 A還原酶抑制劑，是臨床廣泛應用的降脂藥物。他汀類藥物除降脂穩(wěn)定斑塊的作用外，還具有抗炎、抗氧化應激等作用。近年來，

4、一些臨床研究和動物實驗顯示，他汀類藥物具有預防房顫的作用。但是，現有的研究仍十分有限，不足以證明他汀的抗房顫作用，且他汀預防房顫的分子機制尚不完全清楚。髓過氧化物酶（myeloperoxidase，MPO）是由激活的中性粒細胞和單核細胞等分泌的血紅素蛋白酶。它不僅與多種心血管疾病密切相關，還參與了房顫的發(fā)病機制。研究顯示，MPO催化多種活性物質的生成，通過介導多種細胞內的信號轉導通路，促進心房重構，最終導致房顫；房顫患者心房MPO水平明

5、顯升高，而他汀類藥物能夠降低心血管患者血漿MPO水平。因此，他汀類藥物可能通過抑制心房MPO水平，抑制心房重構，從而減少房顫的發(fā)生。
　　本研究通過持續(xù)快速心房起搏3周建立兔房顫模型，探討阿托伐他汀對心房電重構和結構重構的影響及其可能的分子機制。
　　第一部分持續(xù)快速心房起搏兔房顫模型的建立
　　目的：探討采用快速心房起搏建立兔房顫模型的可行性，觀察模型制備后兔心房和心室結構和功能的變化。
　　方法：
　　

6、20只新西蘭大白兔隨機分為兩組：快速心房起搏組（n=10）給予持續(xù)快速心房起搏3周；假手術組（n=10）不予起搏。
　　1觀察起搏前后兩組兔一般情況的變化，包括：體重、呼吸頻率和心率等。
　　2起搏前后分別對兩組兔行超聲心動圖檢查評價心房和心室結構和功能的變化。
　　3起搏前后分別對兩組兔行心房Burst刺激檢測兔房顫誘發(fā)率。
　　4起搏后對兩組兔心房組織進行Masson染色評價心房間質纖維化程度。
　　結

7、果：
　　1一般情況：20只新西蘭大白兔，實驗結束時快速心房起搏組成功7只，假手術組成功7只。起搏干預前兩組兔的體重，呼吸頻率和心率無明顯差異（P＞0.05）；起搏3周后將快速心房起搏組兔起搏器設置為關閉狀態(tài)，測得其呼吸頻率、心率較假手術組增加（P＜0.05）；體重較假手術組無明顯變化（P＞0.05）。
　　2超聲心動圖各指標變化：起搏前兩組心房和心室的各項超聲指標無明顯差異（P＞0.05）?？焖倨鸩?周后，與假手術組相比，

8、快速心房起搏組兔左心房內徑（LAD）、左心房最大容量（LAVmax）和左心房最小容量（LAVmin）明顯增加（P＜0.05），左心房射血分數（LAEF）明顯下降（P＜0.05）；左心室舒張末期內徑（LVEDD）無明顯差異（P＞0.05），左心室收縮末期內徑（LVESD）略增加（P＜0.05），左心室射血分數（LVEF）略下降（P＜0.05）。
　　3房顫誘發(fā)率變化：起搏前行心電圖檢查，兩組家兔均為竇性心律，經心房Burst刺激均未

9、能誘發(fā)房顫。起搏3周后，心電圖顯示：假手術組家兔仍為竇性心律，經Burst刺激亦均未誘發(fā)房顫；快速心房起搏組兔關閉心房起搏器后，心電圖證實其均為竇性心律，經Burst刺激后，7只兔子中有6只誘發(fā)持續(xù)性房顫（持續(xù)時間大于30分鐘），誘發(fā)率86％。
　　4心房纖維化程度變化：起搏3周后，心房組織Masson染色結果顯示快速心房起搏組間質纖維化百分比（31%）較假手術組（5%）明顯增加（P＜0.05）。
　　結論：快速起搏心房3周

10、后，兔可誘發(fā)持續(xù)性房顫，出現明顯的心房重構，而心室結構和功能不受影響。因此快速心房起搏可以建立理想的兔房顫模型。
　　第二部分阿托伐他汀對快速心房起搏兔房顫模型心房電重構的影響
　　目的：通過快速起搏心房3周建立兔房顫模型，探討阿托伐他汀對該房顫動物模型心房電重構的影響。
　　方法：
　　18只新西蘭大白兔隨機分為3組：對照組（n=6）給予快速心房起搏3周及生理鹽水灌胃（10ml/d）；阿托伐他汀組（n=6）給予

11、快速心房起搏3周及阿托伐他汀灌胃（2.5mg/kg/d，溶解于10ml生理鹽水中）；假手術組（n=6）不起搏，不給藥。
　　1采用S1S2程序遞減刺激法，分別于起搏前后測定3組兔心房有效不應期（AERP）。
　　2起搏前后分別對3組兔行心房Burst刺激檢測兔房顫誘發(fā)率。
　　3采用PCR方法檢測3組兔心房Cav1.2和Kv4.3的mRNA含量。
　　4采用Western blot方法檢測3組兔心房Cav1.2和

12、Kv4.3的蛋白含量。
　　結果：
　　1 AERP檢測：起搏前三組兔AERP無明顯差異（P＞0.05）；起搏3周后，對照組和阿托伐他汀組的AERP與假手術組相比均明顯下降（P＜0.05），但阿托伐他汀組經藥物治療后AERP較對照組增加（P＜0.05）。
　　2房顫誘發(fā)率檢測：起搏開始前行心電圖檢查，三組兔均為竇性心律，經心房Burst刺激均未能誘發(fā)房顫。起搏3周后，心電圖顯示：三組兔仍為竇性心律；經心房Burst刺激

13、后，假手術組兔均未誘發(fā)房顫，對照組6只兔中有5只誘發(fā)持續(xù)性房顫（誘發(fā)率83%），阿托伐他汀組6只兔中有4只誘發(fā)持續(xù)性房顫（誘發(fā)率67%）。
　　3心房組織Cav1.2和Kv4.3的mRNA水平檢測：起搏3周后，對照組和阿托伐他汀組心房 Cav1.2mRNA水平較假手術組明顯下降（ P＜0.05），但阿托伐他汀組經藥物治療后Cav1.2mRNA水平較對照組增加（P＜0.05）；對照組和阿托伐他汀組心房 Kv4.3mRNA水平較假手術

14、組明顯下降（P＜0.05），且對照組和阿托伐他汀組的Kv4.3mRNA水平無明顯差異（P＞0.05）。
　　4心房組織Cav1.2和Kv4.3蛋白水平的檢測：起搏3周后，對照組和阿托伐他汀組心房 Cav1.2蛋白水平較假手術組明顯下降（P＜0.05），但阿托伐他汀組經藥物治療后其 Cav1.2蛋白水平較對照組增加（ P＜0.05）；對照組和阿托伐他汀組心房 Kv4.3蛋白水平較假手術組明顯下降（P＜0.05），且對照組和阿托伐他汀

15、組的Kv4.3蛋白水平無明顯差異（P＞0.05）。
　　結論：阿托伐他汀能夠抑制快速心房起搏兔房顫模型心房Cav1.2表達水平的下調和AERP的縮短，抑制心房電重構。
　　第三部分阿托伐他汀對快速心房起搏兔房顫模型心房結構重構的影響
　　目的：通過快速起搏心房3周建立兔房顫模型，探討阿托伐他汀對該房顫模型心房結構重構的影響。
　　方法：
　　18只新西蘭大白兔隨機分為3組：對照組（n=6）給予快速心房起搏3

16、周及生理鹽水（10ml/d）；阿托伐他汀組（n=6）給予快速心房起搏3周及阿托伐他汀（2.5mg/kg/d，溶解于10ml生理鹽水中）；假手術組（n=6）不起搏，不給藥。
　　1起搏前后分別對3組兔行超聲心動圖檢查評價心房和心室的結構和功能。
　　2對3組兔心房組織進行Masson染色評價心房間質纖維化程度。
　　3采用PCR方法檢測3組兔心房Ⅰ型和Ⅲ型膠原蛋白mRNA含量。
　　4采用Western blot方

17、法檢測3組兔心房Ⅰ型和Ⅲ型膠原蛋白的蛋白含量。
　　結果：
　　1超聲心動圖各指標變化：快速起搏前三組兔心房的各項超聲指標無明顯差異（P＞0.05）；快速起搏3周后，對照組和阿托伐他汀組兔左心房較假手術組明顯擴張，LAD、LAVmax和LAVmin明顯增加（P＜0.05）， LAEF明顯下降（P＜0.05），但對照組和阿托伐他汀組相比較，兩組的LAD、LAVmax、LAVmin和LAEF均無明顯差異（P＞0.05）?？焖倨鸩?/p>

18、前三組兔心室的各項超聲指標（包括：LVESD、LVEDD和LVEF）無明顯差異（P＞0.05）；快速起搏3周后，三組兔的以上各項心室超聲指標仍無明顯差異（P＞0.05）。
　　2心房纖維化程度變化：快速起搏3周后，對三組兔心房組織進行Masson染色，結果示：假手術組兔心房組織僅有少量的間質纖維組織，約占心房組織的4%；對照組兔心房組織的纖維化程度較假手術組明顯增加（P＜0.05），間質纖維組織約占心房組織的33%，；阿托伐他汀組

19、較假手術組亦明顯增加（P＜0.05），間質纖維組織約占心房組織的24%，但其較對照組明顯下降（P＜0.05）。
　　3心房組織Ⅰ型和Ⅲ型膠原蛋白mRNA表達水平檢測：起搏3周后，對照組和阿托伐他汀組心房Ⅰ型和Ⅲ型膠原蛋白mRNA水平較假手術組明顯增加（P＜0.05），但阿托伐他汀組經藥物治療后心房Ⅰ型和Ⅲ型膠原蛋白水平較對照組下降（P＜0.05）。
　　4心房組織Ⅰ型和Ⅲ型膠原蛋白的蛋白表達水平檢測：起搏3周后，對照組和阿托

20、伐他汀組心房Ⅰ型和Ⅲ型膠原蛋白的蛋白表達水平較假手術組明顯增加（P＜0.05），但阿托伐他汀組經藥物治療后心房Ⅰ型和Ⅲ型膠原蛋白水平較對照組下降（P＜0.05）。
　　結論：阿托伐他汀能夠抑制快速心房起搏兔房顫模型心房間質纖維化和膠原蛋白沉積，抑制心房結構重構。
　　第四部分阿托伐他汀對快速心房起搏兔房顫模型心房重構影響的機制探討
　　目的：通過快速起搏心房3周建立兔房顫模型，探討阿托伐他汀對該房顫模型心房重構影響的可

21、能機制。
　　方法：
　　18只新西蘭大白兔隨機分為3組：對照組（n=6）給予快速心房起搏3周及生理鹽水（10ml/d）；阿托伐他汀組（n=6）給予快速心房起搏3周及阿托伐他汀（2.5mg/kg/d，溶解于10ml生理鹽水中）；假手術組（n=6）不起搏，不給藥。
　　1采用PCR方法檢測3組兔心房MPO、基質金屬蛋白酶（MMP）-2、MMP-9和金屬蛋白酶組織抑制劑（TIMP）-1的mRNA含量。
　　2采用We

22、stern blot方法檢測3組兔心房MPO、MMP-2、MMP-9和TIMP-1的蛋白含量。
　　結果：
　　1心房組織MPO、MMP-2、MMP-9和TIMP-1 mRNA表達水平的檢測：起搏3周后，對照組和阿托伐他汀組 MPO、MMP-2和 MMP-9的mRNA表達水平較假手術組表明顯增加（P＜0.05），但阿托伐他汀組經藥物治療后其心房組織中此三種 mRNA的表達較對照組下降（P＜0.05）；對照組和阿托伐他汀組TI

23、MP-1 mRNA表達水平較假手術組明顯增加（P＜0.05），且對照組和阿托伐他汀組TIMP-1 mRNA的表達無明顯差異（P＞0.05）。
　　2心房組織MPO、MMP-2、MMP-9和TIMP-1蛋白表達水平的檢測：起搏3周后，對照組和阿托伐他汀組MPO、MMP-2和MMP-9蛋白表達水平較假手術組明顯增加（P＜0.05），但阿托伐他汀組經藥物治療后其心房組織中此三種蛋白的表達較對照組下降（P＜0.05）；對照組和阿托伐他汀組