豬脂肪組織中ZAG及GR變體的表達(dá)及其調(diào)控.pdf

1、本試驗(yàn)旨在探索豬脂肪組織中鋅α2糖蛋白（zinc-alpha2-glycoprotein，ZAG）的表達(dá)與調(diào)控以及糖皮質(zhì)激素受體（glucocorticoid receptor, GR）及其變體的分布情況。試驗(yàn)研究了斷奶大白豬與二花臉豬背脂中ZAG基因的表達(dá)及其可能的轉(zhuǎn)錄調(diào)控機(jī)制，分析了梅山豬腎周脂與背脂，斷奶階段大白豬與二花臉豬背部皮下脂肪組織中GR及其變體的表達(dá)情況。
　　 1.不同品種豬之間ZAG及脂代謝相關(guān)基因的表達(dá)研究

2、選取35日齡斷奶大白豬與二花臉豬，稱重，斷頸宰殺。宰后采集大白豬與二花臉豬頸背部脂肪，采用相對(duì)定量實(shí)時(shí)熒光PCR以及免疫印跡(Western blot，WB)方法檢測(cè)斷奶大白豬與二花臉豬背脂中ZAG及脂代謝相關(guān)基因如perilipin，F(xiàn)AS，HSL，PPARγ，PPARα，TNF-α，β3-AR, C/EBP-β，ATGL的表達(dá)。本研究首次得到全長(zhǎng)為1090bp的豬ZAG基因序列，利用MegAlign軟件與NCBI中序列進(jìn)行比較，結(jié)果

3、表明豬的ZAG基因的核苷酸序列與牛的同源性最高，為82.2％，與小鼠的同源性最低，為69.5％。
　　 二花臉與大白豬ZAG mRNA表達(dá)在肝臟中最高，明顯高于其他組織，睪丸組織中表達(dá)量最低。大白豬背脂中ZAG mRNA與蛋白表達(dá)極顯著高于二花臉豬(P＜0.01)。ZAG可以與β3型腎上腺素能受體結(jié)合，大白豬背脂中β3-AR的mRNA表達(dá)極顯著低于二花臉豬（P＜0.01）。PPARγ、TNF-α以及perilipin基因mRNA

4、表達(dá)在兩品種間無(wú)顯著性差異。HSL與C/EBPβmRNA表達(dá)大白豬顯著高于二花臉豬(P＜0.05），但蛋白表達(dá)以及HSL的磷酸化蛋白表達(dá)無(wú)差異。而大白豬的脂肪酶活性顯著性高于二花臉豬(P＜0.05）。能量代謝關(guān)鍵基因CPT1與UCP2 mRNA表達(dá)大白豬顯著高于二花臉豬(P＜0.05)，UCP2蛋白表達(dá)大白豬顯著高于二花臉豬（P＜0.05）。本研究結(jié)果提示ZAG參與到豬脂肪代謝中并在一定程度上對(duì)不同品種豬之間的脂肪沉積造成影響，并且二花

5、臉豬中較高的體脂沉積可能是其通過(guò)介導(dǎo)脂肪的分解以及機(jī)體產(chǎn)熱的降低使脂肪的利用減少而導(dǎo)致的。
　　 2.豬脂肪組織中GR及變體的表達(dá)及分布選取育肥階段梅山豬以及35日齡斷奶大白豬與二花臉豬，稱重，斷頸宰殺。宰后采集育肥梅山豬頸背部脂肪及腎周脂，斷奶大白豬與二花臉豬頸背部脂肪，采用相對(duì)定量實(shí)時(shí)熒光PCR方法檢測(cè)豬脂肪組織中GR及exon1變體的表達(dá)。結(jié)果顯示，GR mRNA表達(dá)在育肥梅山豬背脂與腎周脂間無(wú)顯著性差異，但是背脂exon

6、1-7和exon1-9的mRNA表達(dá)顯著高于腎周脂(P＜0.05）。斷奶大白豬背脂與二花臉豬背脂之間無(wú)顯著性差異，然而斷奶大白豬背脂中exon1-6的mRNA表達(dá)顯著高于二花臉豬(P＜0.05）。兩品種exon1各變體啟動(dòng)子的甲基化程度雖然有個(gè)別位點(diǎn)是有顯著性差異，但exon1-5與exon1-6之間的啟動(dòng)子部分以及exon1-6之前的啟動(dòng)子甲基化程度在兩品種間沒(méi)有差異，說(shuō)明甲基化可能并不是造成exon1-6 mRNA表達(dá)品種間差異的主