甜菜夜蛾滯育激素-性信息合成激活肽（DH-PBAN）基因和促前胸腺激素（PTTH）基因的克隆和表達分析.pdf

1、利用兼并引物分別擴增出甜菜夜蛾的促前胸腺激素(pmthoracicotropic hormone，PTTH)和滯育激素(diapause hormone，DH)cDNA，克隆和測序結(jié)果顯示出PTTHcDNA包含一個編碼226個氨基酸的開放閱讀框：信號肽、一個未知肽和PTTH。和其它已知物種的PTTH比較，甜菜夜蛾和夜蛾科昆蟲有較高的同源性，和其它昆蟲的相似性稍低，但是PTTH分子中的7個半胱氨酸殘基的位置是保守且一致的。用棉鈴蟲PTTH

2、抗體進行整體免疫組織化學(xué)檢測，發(fā)現(xiàn)PTTH在甜菜夜蛾腦中的兩對神經(jīng)分泌細胞中表達。Northern雜交表明PTTH mRNA約1．2 kb，特異表達在腦組織。半定量RT-PCR檢測了PTTH在幼蟲期和蛹期的發(fā)育變化，顯示出PTTH表達和蛻皮變態(tài)有密切的關(guān)系，暗示PTTH在甜菜夜蛾行使其生物學(xué)功能很可能也是通過刺激前胸腺合成和分泌蛻皮激素來完成的。從甜菜夜蛾咽下神經(jīng)節(jié)克隆到全長為798bD的DH cDNA，該基因開放閱讀框編碼197個氨基

3、酸，包含DH、性信息素合成激活肽和3個功能未知的咽下神經(jīng)節(jié)神經(jīng)肽，它們的C末端都是保守的FXPR/KL(X=G、T、S)序列，和已知鱗翅目昆蟲DH cDNA有較高同源性，且組織結(jié)構(gòu)相同。Northern分析顯示DH mRNA特異表達于咽下神經(jīng)節(jié)，轉(zhuǎn)錄本為800bp，在幼蟲和成蟲中表達較高，可能和幼蟲發(fā)育和刺激成蟲分泌性信息素有關(guān)，暗示DH基因除了調(diào)節(jié)昆蟲滯育外，可能有其它的生理功能。滯育激素和促前胸腺激素在非滯育昆蟲甜菜夜蛾中均有表達，

4、在時空上顯出特定的表達模式，說明它們和生長發(fā)育相關(guān)。 對棉鈴蟲滯育蛹的抗寒機理的調(diào)查，發(fā)現(xiàn)海藻糖含量在滯育和非滯育棉鈴蟲蛹個體有顯著差異。海藻糖是主要的昆蟲血糖，海藻糖的合成依賴于6-磷酸海藻糖合成酶。據(jù)此，我們克隆了棉鈴蟲6-磷酸海藻糖合成酶cDNA，該cDNA全長1827 bp，開放閱讀框編碼536個氨基酸的合成酶，用家蠶桿狀病毒體系表達6-磷酸海藻糖合成酶，成功獲得具有酶活性的蛋白。對棉鈴蟲不同發(fā)育時期的血淋巴進行6-磷