萊菔硫烷對(duì)鎘致大鼠肝腎毒性保護(hù)作用的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、鎘（Cadmium，Cd）是環(huán)境中常見的對(duì)人體毒性很強(qiáng)的重金屬污染物，在工業(yè)中用途廣泛，主要用于電鍍，顏料，合金，電池等，相當(dāng)數(shù)量的鎘通過工業(yè)企業(yè)排出的廢氣、廢水、廢渣污染環(huán)境，我國每年就有600余噸鎘排入環(huán)境，造成嚴(yán)重的環(huán)境污染。鎘對(duì)人體肺部、肝臟、腎臟、心血管系統(tǒng)、骨骼、泌尿生殖系統(tǒng)、免疫系統(tǒng)、神經(jīng)系統(tǒng)（聽覺系統(tǒng)）等都會(huì)造成損害。肝臟和腎臟是鎘最重要的蓄積部位和主要靶器官，因此，研究鎘對(duì)肝臟和腎臟損傷的機(jī)制及其保護(hù)因素具有重要意義。

2、
　　目的：
　　萊菔硫烷(Sulforaphane，SFN)廣泛存在于十字花科植物中，具有較強(qiáng)的抗氧化能力，這些植物中含有豐富的硫代葡萄糖，其水解后生成異硫氰酸鹽，異硫氰酸鹽以萊菔硫烷為主要形式存在。研究表明，萊菔硫烷通過激活核轉(zhuǎn)錄因子E2相關(guān)因子2(Nuclear factor erythroid2-related factor, Nrf2)，進(jìn)而調(diào)節(jié)二相酶和抗氧化酶發(fā)揮生物功能。
　　方法：
　　一、急性多

3、次染鎘實(shí)驗(yàn)
　　由中國醫(yī)科大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供的清潔級(jí)Wistar大鼠48只，體重170±10 g，雌雄各半，實(shí)驗(yàn)動(dòng)物合格證號(hào):SYXK（遼）2008-0005。動(dòng)物實(shí)驗(yàn)室溫度17-23℃，相對(duì)濕度45-55％。普通光照，動(dòng)物飼料由實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供。正式實(shí)驗(yàn)前飼養(yǎng)1周。按體重隨機(jī)分成4組，每組12只，雌雄各半。第1組為對(duì)照組，第2、3組為低、高劑量單純?nèi)炬k組，第4組為SFN干預(yù)組。1-3組大鼠皮下注射生理鹽水，SFN干預(yù)組2 mg

4、/kg SFN皮下注射;2h后，對(duì)照組腹腔注射生理鹽水，2-4組分別腹腔注射4、12、12μmol/kg CdCl2，注射容量均為5 mg/kg。連續(xù)處理5天。最后一次染毒24 h后，將各組大鼠乙醚麻醉，取8只腹主動(dòng)脈采血，測定血清谷丙轉(zhuǎn)氨酶（Alanine transaminase，ALT）和乳酸脫氫酶(Lactate dehydrogenase，LDH)活力;心臟放血處死，切取肝組織制備成勻漿，測定還原型谷胱甘肽(Glutathio

5、ne，GSH)、丙二醛(Malondialdehyde，MDA)含量和超氧化物歧化酶(Superoxidedismutase，SOD)、谷胱甘肽過氧化物酶(Glutathione peroxidase，GSH-Px)活力;另取4只心臟放血處死，切取肝組織制備成單細(xì)胞懸液用于測定活性氧簇(Reactiveoxygen specie，ROS)水平和細(xì)胞凋亡率。
　　二、亞慢性染鎘實(shí)驗(yàn)
　　由中國醫(yī)科大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供的清潔級(jí)W

6、istar大鼠48只，體重170±10 g，雌雄各半，實(shí)驗(yàn)動(dòng)物合格證號(hào):SYXK（遼）2008-0005。動(dòng)物實(shí)驗(yàn)室溫度17-23℃，相對(duì)濕度45-55％，動(dòng)物飼料由實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供。正式實(shí)驗(yàn)前飼養(yǎng)1周。按體重隨機(jī)分成4組，每組12只，雌雄各半。第1組為對(duì)照組，第2、3組為低、高劑量單純?nèi)炬k組，第4組為SFN干預(yù)組。1-3組大鼠皮下注射生理鹽水，SFN干預(yù)組1 mg/kg SFN皮下注射;2h后，對(duì)照組腹腔注射生理鹽水，2-4組分別腹腔

7、注射3、6、6μmol/kg CdCl2，注射容量均為5 mg/kg。皮下注射隔日1次，每周3次，腹腔注射每日1次，每周5次，連續(xù)處理6周。將各組6只大鼠放入代謝籠，收集24 h尿液，測定尿蛋白含量，及堿性磷酸酶(Alkaline phosphatase，ALP)、乳酸脫氫酶(Lactate dehydrogenase，LDH)、β-N-乙酰氨基葡萄糖苷酶(N-acetyl-beta-D-glucasaminidase，NAG)的活力;

8、而后將各組大鼠乙醚麻醉，取各組8只大鼠進(jìn)行腹主動(dòng)脈取血，測定血清尿素氮（Blood urea nitrogen，BUN）的含量;然后處死大鼠，取出腎臟，冰浴下切取腎皮質(zhì)，制備成勻漿液待用，測定谷胱甘肽(GSH)、丙二醛(MDA)的含量，及超氧化物歧化酶(SOD)和谷胱甘肽過氧化物酶(GSH-Px)的活力;另取各組剩余4只大鼠麻醉后心臟放血處死，于冰浴下切取大鼠腎皮質(zhì)，制備單細(xì)胞懸液用于測定ROS含量和細(xì)胞凋亡壞死率;檢測Nrf2及下游基

9、因血紅素氧合酶-1(Heme oxygenase-1，HO-1)和γ-谷氨酰半胱氨酸合成酶（Gamma-Glutamylcysteine synthetase，γ-GCS）的mRNA和蛋白的表達(dá)。
　　結(jié)果：
　　一、急性多次染鎘實(shí)驗(yàn)
　　與對(duì)照組比較，隨著染鎘劑量的增加，大鼠血清LDH、ALT活力逐漸升高，肝組織GSH含量、GSH-Px和SOD活力逐漸降低，MDA的含量逐漸升高，細(xì)胞內(nèi)ROS水平和細(xì)胞凋亡壞死率逐漸升

10、高。與高鎘組比較，萊菔硫烷干預(yù)組中大鼠血清LDH和ALT活力明顯下降，肝組織GSH含量、GSH-Px和SOD活力明顯升高，MDA的含量明顯下降，肝細(xì)胞ROS水平和細(xì)胞凋亡率明顯下降。
　　二、亞慢性染鎘實(shí)驗(yàn)
　　與對(duì)照組比較，隨著染鎘劑量的增加，大鼠血清BUN的含量逐漸升高，尿蛋白含量、尿NAG、ALP及LDH活力逐漸升高，腎組織GSH含量、GSH-Px和SOD活力逐漸降低，MDA的含量逐漸上升，細(xì)胞ROS水平和細(xì)胞凋亡壞死

11、率逐漸升高，Nrf2、HO-1和γ-GCS的mRNA和蛋白表達(dá)水平逐漸升高。與高鎘組比較，萊菔硫烷干預(yù)組大鼠血清BUN含量明顯下降，尿蛋白含量、尿NAG、ALP及LDH活力明顯下降，腎組織GSH含量、GSH-Px和SOD活力明顯升高，MDA的含量明顯下降，細(xì)胞ROS水平和細(xì)胞凋亡率明顯降低，Nrf2、HO-1和γ-GCS的mRNA和蛋白表達(dá)水平明顯上升。
　　結(jié)論：
　　1、氯化鎘急性多次染毒可致大鼠肝臟出現(xiàn)氧化損傷，萊菔硫