倒刺鲃雄激素受體cDNA克隆、序列分析及時空表達.pdf

1、雄激素(androgens)在脊椎動物性別分化、性腺成熟和生殖行為中扮演著重要角色，而雄激素的作用是通過雄激素受體介導(dǎo)的。本論文克隆了倒刺鲃(Spinibarbusdenticulatus)雄激素受體(androgenreceptor，AR)的全長cDNA，分析了其序列特征，比較了氨基酸序列同源性，并研究了AR的時空表達情況。從倒刺鲃精巢克隆得到的ARcDNA全長3172bp，可讀編碼框為2595bp，編碼865個氨基酸，預(yù)計分子量為9

2、5.4kDa，理論等電點(pI)為7.13。倒刺鲃AR基因存在高度可變的轉(zhuǎn)錄激活結(jié)構(gòu)域(TAD)、高度保守的DNA結(jié)合結(jié)構(gòu)域(DBD)和中度保守的配體結(jié)合結(jié)構(gòu)域(LBD)，與其他硬骨魚類相比，三種結(jié)構(gòu)域的同源相似性分別為：TAD，12～83％；DBD，73～99％；LBD，65～98％。將倒刺鲃AR的氨基酸序列與其它動物進行同源性比較，并構(gòu)建進化樹，結(jié)果顯示，倒刺鲃AR與鯉科魚類中的金魚(Carassiusauratus)同源性最高，其

3、次是黑頭軟口鰷(Pimephalespromelas)和斑馬魚(Daniorerio)。組織分布結(jié)果表明：AR在雄魚腦各分區(qū)均有表達，外周組織以精巢、肝、脾、腎、頭腎、心臟、紅肌、白肌和胃的表達水平最高，在皮膚、鰓和脂肪組織也有微量表達；AR在雌魚的嗅球、端腦、下丘和垂體中有表達，外周組織以肝臟和心臟的表達水平最高，在脾、腎、頭腎、紅肌和皮膚中有微量表達。運用RT-PCR技術(shù)研究ARmRNA在倒刺鲃胚胎發(fā)育過程的表達情況，結(jié)果顯示：AR

4、在受精卵、16細胞期、囊胚中期都有微弱的表達；原腸中期和神經(jīng)胚期沒有表達；表達水平在胚孔封閉期、眼囊期和尾芽期逐漸升高；肌肉效應(yīng)期表達水平降低，晶體出現(xiàn)期升高，心跳期降低；孵化前期、初孵仔魚和孵化后4天(4DPH)仔魚AR的表達水平呈現(xiàn)逐漸升高的趨勢。采用組織學(xué)方法鑒定腦、垂體、肝和性腺樣品所處的性腺發(fā)育階段，然后利用Realtime-PCR技術(shù)定量檢測腦、垂體、肝、性腺四種組織的AR在倒刺鲃性腺發(fā)育早期、性腺發(fā)育中期和性腺成熟期的表達

5、水平，結(jié)果顯示：對于雄魚，精巢發(fā)育早期、中期和成熟期，腦組織AR的相對表達水平存在顯著性差異；精巢發(fā)育早期和中期，垂體組織AR的相對表達水平顯著低于精巢成熟期，早期和中期AR的相對表達水平差異不顯著；精巢發(fā)育中期和成熟期，精巢組織AR的相對表達水平顯著低于精巢發(fā)育早期，中期和成熟期AR的相對表達水平差異不顯著。精巢發(fā)育早期、中期和成熟期，肝臟組織AR的相對表達水平存在顯著性差異。對于雌魚，卵巢發(fā)育早期，腦組織AR的的相對表達水平顯著低于