大鼠甲狀腺激素受體β1cdna克隆及其在e.coli.中的表達(dá)

1、天津醫(yī)科大學(xué)碩士學(xué)位論文大鼠甲狀腺激素受體β1 cDNA克隆及其在E.coli.中的表達(dá)姓名：穆成申請學(xué)位級別：碩士專業(yè)：生物化學(xué)與分子生物學(xué)指導(dǎo)教師：張鏡宇20060522天津醫(yī)科太學(xué)碗士學(xué)位論文摘。誓i 羹甲狀腺激素受件( t h y r o i dh o m o n e r e c e p t o r ，T R ) 屬于核受體超家旗的成員，廣泛分布在各種組織中。丁R 存在2 種主要的亞型；T R a 和聊。而由于轉(zhuǎn)錄起始點(diǎn)以及剪切

2、方式的不同，每種Ⅱ型又包括若干同功體( i s o f o 珊s ) 。主要的有T R a l 、T R a 2 、T R a 3 、T R △a l 、T R △a 2 、T R B l 、J m B 2 、T R B 3 、T R A B 3 等。在臨床上，T R B 基因與T H 抵抗( r e s i s t 8 n c e 吣l h y r o i dh o 吼o n e ，姍) 有著緊密聯(lián)系。而進(jìn)一步了解I R B 結(jié)構(gòu)，對

3、于設(shè)計新型降脂藥物也有重要意義。本研究工作中，我們以大鼠肝臟組織的總R N A 為模板，R T - P c R 方法擴(kuò)增出全長大鼠甲狀腺激素受體B 1 ( r 豫B 1 ) 基因編碼序列，克隆入D G E M —TE a s y 載體，糾正其錯配堿基后將目的基因插入融合型原核表達(dá)載體p O E ·3 0 x a ，測序鑒定。重鯧表達(dá)質(zhì)粒p Q E ．3 0 x a ，刪1 轉(zhuǎn)化入E ．c o f fM 1 5 f p R E

4、P 4 】，進(jìn)行融合表達(dá)。s D s —只A O E 電泳查看表達(dá)產(chǎn)物大小和表達(dá)量，w e s t e m ．b 1 0 t t i n g 進(jìn)。一步鑒定。表達(dá)條件經(jīng)優(yōu)化后，r 1 R B l 的表達(dá)量達(dá)到6 m 扎培養(yǎng)基。重組蛋白r T R B l 占菌體蛋白的2 4 ．3 2 ％。目的蛋白含6 ×H i s 純化標(biāo)簽，可吼經(jīng)金屬螯合親和層析吸附于N i ．N 1 A 樹臘層析柱，沖洗除去非特異吸附的雜蛋白后，將目的蛋白洗脫