鋸緣青蟹蛻皮抑制激素cDNA分子克隆及序列分析.pdf

1、據(jù)珠青蟹銳皮抑制激紊cDNA分子克隆及序列分析鋸緣青蟹蛻皮抑制激素cDNA分子克隆及序列分析摘要本文采用逆轉(zhuǎn)錄一聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(RTPCR)方法，從鋸緣青蟹的眼柄神經(jīng)節(jié)總cDNA序列，經(jīng)克隆后、RNA中擴(kuò)增出編碼蛻皮抑制激素(MIH)的肚及部分信號肚，長度為測序，結(jié)果表明，該。DNA編碼MIH成熟3166pRNA斑點雜交實驗顯示，MIH基因在眼柄神經(jīng)節(jié)及腦組織中均有表達(dá)，而在肌肉、肝胰臟中不表達(dá)。滬得到的核昔酸序列以及由此推導(dǎo)的氨基酸序

2、列分”11t1GENBANKSWISSPROT數(shù)據(jù)庫進(jìn)行同源序列查找，結(jié)果顯示鋸緣青蟹cDN人序列及由此推導(dǎo)的氨基酸序列與美洲藍(lán)蟹的相似性最高，為90%以上，與短尾類中其它物種的MTH的相似性也較高，可達(dá)到79.5%89%。使用ClustalWMEGA生物軟件對己知MIH進(jìn)行系統(tǒng)進(jìn)化分析，發(fā)現(xiàn)除個別物種外，MIH的分子系統(tǒng)樹與物種的傳統(tǒng)進(jìn)化樹基本一致。使用ComputepIMwSAPSPredictProtein等生物軟件對鋸緣青蟹的M

3、IH進(jìn)行序列分析、理化性質(zhì)及結(jié)構(gòu)的預(yù)測，發(fā)現(xiàn)預(yù)測的MIH的分子量及等電點與其它短尾類的MIH極為接近，MIH為球狀蛋白，具有潛在的翻譯后修飾現(xiàn)象，可為選擇合適的體外表達(dá)載體及表達(dá)產(chǎn)物的分離純化提據(jù)蛛青蟹蛻皮抑制漱素CDN^分子克隆及序3.1全竺MolecularCloningandSequenceAnalysisofaMoltInhibitingHormonecDNAinthemudcrabScyllaserrataABSTRACTBy

4、meansofreversetranscriptionpolymerasechainreaction(RTPCR)afragmentofcDNAencodingmoltinhibitinghormone(MIH)wasamplifiedfromthetotalRNAofeyestalkneuralgangliaofthemudcrabScyllaserrata.ThenthefragmentwasclonedintopUCmTvecto

5、randsequenced.Thetotallengthofthesequencewas316bpincludingasequenceencodingmaturepeptideandapartialsequenceencodingsignalpeptide.TheresultsofRNAdothybridizationshowedthattheMIHgenewasexpressedonlyintheeyestalkandbrainwit

6、houtinothertissuesofthemudcrabScyllaserrata.AccordingtothesearchresultsofGenBankandSwissprotdatabasesthecDNAfragmentandthededucedaminoacidsequence(onlymaturepeptideofMIH)share79.5%91.5%identitywiththatofotheranimalsinthe