MicroRNA-581通過(guò)EDEM1調(diào)節(jié)HBsAg的表達(dá).pdf

1、乙型肝炎病毒（HBV）感染嚴(yán)重影響著人類的健康，血清HBV表面抗原（HBsAg）是篩查HBV感染的指標(biāo)之一，血清HBsAg陽(yáng)性也是肝細(xì)胞肝癌發(fā)生的重要危險(xiǎn)因素。MiRNAs在肝癌組織中表達(dá)通常呈下降趨勢(shì)，但這種表達(dá)下調(diào)是否影響HBsAg的表達(dá)還不明確。我們的研究發(fā)現(xiàn):在肝癌細(xì)胞中過(guò)表達(dá)miR-581可促進(jìn)HBsAg的表達(dá)。此外，miR-581是通過(guò)與EDEM1基因的3'端非翻譯區(qū)(UTR)的識(shí)別結(jié)合來(lái)發(fā)揮抑制作用的。EDEM1可調(diào)節(jié)HB

2、sAg的降解，我們發(fā)現(xiàn)過(guò)表達(dá)EDEM1可抑制miR-581對(duì)HBsAg表達(dá)的誘導(dǎo)。因此，肝癌細(xì)胞中miR-581對(duì)HBsAg表達(dá)的調(diào)節(jié)是由EDEM1介導(dǎo)的。肝癌細(xì)胞中miR-581表達(dá)的下調(diào)可能是降低HBsAg表達(dá)并阻礙肝細(xì)胞肝癌發(fā)展的重要原因。
　　目的:
　　在HepG2.2.15和Huh7兩種不同的肝癌細(xì)胞中，探究miR-581對(duì)HBsAg的表達(dá)是否具有調(diào)控作用及其可能的作用機(jī)制。
　　方法:
　　(1)在

3、HepG2.2.15和Huh7細(xì)胞系中過(guò)表達(dá)或敲低miR-581，通過(guò)ELISA及Western blot檢測(cè)HBsAg的表達(dá)水平。
　　(2)用雙熒光素酶報(bào)告基因?qū)嶒?yàn)檢測(cè)miR-581對(duì)其靶基因的3'-UTR識(shí)別和調(diào)節(jié)作用。
　　(3)在HepG2.2.15和Huh7細(xì)胞系中過(guò)表達(dá)或敲低miR-581，用實(shí)時(shí)熒光定量(RT-PCR)和Western blot檢測(cè)EDEM1的表達(dá)水平。
　　(4)在HepG2.2.15

4、和Huh7細(xì)胞系中同時(shí)過(guò)表達(dá)EDEM1與miR-581，用ELISA及Western blot檢測(cè)HBsAg的表達(dá)水平。
　　結(jié)果:
　　(1)過(guò)表達(dá)miR-581使HBsAg的表達(dá)上調(diào)。
　　(2) MiR-581結(jié)合到EDEM1的3'-UTR。
　　(3)過(guò)表達(dá)miR-581可同時(shí)下調(diào)EDED1的蛋白和mRNA表達(dá)水平。
　　(4) EDEM1介導(dǎo)miR-581對(duì)HBsAg表達(dá)的調(diào)節(jié)。
　　結(jié)論: