MicroRNA-155通過調(diào)節(jié)FOXO3a影響膠質(zhì)瘤細胞的增殖和侵襲能力.pdf

1、 碩士學位論文 論文題目 MicroRNA-155 通過調(diào)節(jié) FOXO3a 影響 膠質(zhì)瘤細胞的增殖和侵襲能力 研 究 生 姓 名 凌 南 指導教師姓名 李向東 專 業(yè) 名 稱 神經(jīng)外科 研 究 方 向 顱腦腫瘤的基礎(chǔ)與臨床研究 論文提交日期 2013 年 5 月 MicroRNA-155 通過調(diào)節(jié) FOXO3a 影響膠質(zhì)瘤細胞的增殖和侵襲能力 中文摘要 I MicroRNA-155 通過調(diào)節(jié) FOXO3a 影響膠質(zhì)瘤細胞

2、 的增殖和侵襲能力 中文摘要 【目的 目的】 檢測 miR-155 在膠質(zhì)瘤標本及細胞系中的表達情況， 探討 miR-155 在膠質(zhì)瘤發(fā)生發(fā)展過程中的生物學功能，并探究其相關(guān)機制，為膠質(zhì)瘤的基因治療提供理論基礎(chǔ)。【方法 方法】 第一部分：1、選用人腦膠質(zhì)瘤細胞株 U87、U373、U251、SHG44 和 T98, 人腦正常星形膠質(zhì)細胞株 1800。并收集人腦膠質(zhì)瘤標本 7 例和正常腦組織 2 例。運用qRT-PCR 技術(shù)檢測 miR-

3、155 在膠質(zhì)瘤組及正常對照組中的表達。2、將 miR-155 的模擬體 mimics 轉(zhuǎn)染至 miR-155 表達量最低的細胞株中，將抑制劑 inhibitor（即anti-miR-155）轉(zhuǎn)染至表達量最高的細胞株中，通過流式細胞儀技術(shù)檢測轉(zhuǎn)染后細胞周期、凋亡的變化，通過 CCK-8 方法觀察細胞的增殖情況，以及應(yīng)用劃痕愈合試驗、Transwell 試驗了解其對細胞遷移、侵襲的影響。 第二部分： 1、 根據(jù)生物信息學預測軟件 Targ

4、etScan、 PicTar 和 mirBase 對 miR-155靶基因進行預測，分別應(yīng)用 Western blot 和 qRT-PCR 技術(shù)檢測其可能的靶蛋白FOXO3a 的基因及蛋白表達情況；2、將靶基因 FOXO3a 的 3'UTR 區(qū)克隆到psi-CHECK2 熒光素酶報告基因載體下游,通過雙熒光素酶報告基因檢測 miR-155 對靶基因 FOXO3a 的 3'UTR 區(qū)的調(diào)控作用。最后過表達和抑制表達 miR

5、-155 然后行Western blot 進一步檢測 FOXO3a 蛋白水平的變化。 【結(jié)果 結(jié)果】 第一部分：1、MiR-155 在膠質(zhì)瘤組的表達明顯高于正常對照組(P<0.05)，其中U87 細胞株表達量最高，U251 細胞株表達量最低。2、U251 細胞株在轉(zhuǎn)染 miR-155 mimics 后細胞增殖加快，凋亡率減低，細胞的遷移及侵襲能力增強，而細胞周期未見明顯改變。轉(zhuǎn)染 anti-miR-155 至 U87 細胞株后，呈