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1、中南大學(xué)博士學(xué)位論文LRRC4基因通過LRR結(jié)構(gòu)域抑制腦膠質(zhì)瘤細(xì)胞增殖和侵襲的功能研究姓名:武明花申請學(xué)位級別:博士專業(yè):病理學(xué)與病理生理學(xué)指導(dǎo)教師:李桂源20051201摘要內(nèi)、外抑制腫瘤細(xì)胞的生長作用外,還要進(jìn)行細(xì)胞和分子遺傳學(xué)分析檢測該基因在腫瘤細(xì)胞中的表達(dá)及突變頻率。N o r t b _ ' e m .b l o t 和R T - P C R結(jié)果顯示,L 剛地4 基因在U 2 5 1 、U 8 7 、S F l 2 6
2、 、S F 7 6 7 、B T 3 2 5 和M 1 7 等六種惡性膠質(zhì)瘤細(xì)胞系中表達(dá)均缺失。為了明確L R R C 4 基因在惡性膠質(zhì)瘤細(xì)胞系中表達(dá)缺失是否由編碼區(qū)序列的突變引起,我們進(jìn)一步從這幾種細(xì)胞系的基因組D N A 中擴增L R R C 4 基因的編碼區(qū)序列并進(jìn)行測序分析。結(jié)果發(fā)現(xiàn),S F l 2 6 、S F 7 6 7 和M 1 7 三種細(xì)胞基因組D N A 中均可擴增出L R R C 4 基因的編碼區(qū)序列,但產(chǎn)量明顯低
3、于管家基因G A P D H ,測序分析表明三種膠質(zhì)瘤細(xì)胞串?dāng)U增出來的L R R C 4 基因均在第2 7 9 位氨基酸的第三位密碼子發(fā)生了同義突變( L R R C 4 基因的第9 7 7 位,T 專A ) 。因此,L R R C 4 基因在這三種膠質(zhì)瘤細(xì)胞系中表達(dá)缺失不是基因突變所致。而U 2 5 1 和U 8 7 細(xì)胞基因組D N A 中未能擴增出L R R C 4 基因的編碼區(qū)序列。搜索N C B I 的F I S H和C G
4、H 數(shù)據(jù)庫顯示,U 2 5 1 細(xì)胞在7 p t e r - 1 4 和7 q 3 2 .t e r 區(qū)域存在純合性缺失。因此,L R R C 4 基因在U 2 5 】細(xì)胞中表達(dá)缺失是由于染色體7 q 3 2 .t e r 的純合性缺失所致,這同時也將L R R C 4 在7 號染色體上的定位縮小到7 q 3 2 末端,而不再是7 q 3 l 一3 2 ?!綥 R R C 4 通過L R R 結(jié)構(gòu)域抑制1 .1 2 5 1 細(xì)胞的體外生
5、長】S M A R T 軟件預(yù)測發(fā)現(xiàn)L R R C 4 含有保守的L R R 和I g C 2 結(jié)構(gòu)域。L R R 結(jié)構(gòu)域( L R R c a s s e t t e ) 是由核心L R R s ( t h e c o l eL R 飚) 和兩端富含保守的半胱氨酸位點的末端L R R ( L R R N T 和L R R C T ) 組成。研究表明,只有作為受體、受體激酶或黏附分子的L R P ( ] e u c i n e .r i
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