AG1478通過FOXO3a下調FOXM1表達對肺癌細胞增殖的影響.pdf

1、研究目的：
　　肺癌是世界上惡性腫瘤死亡率最高的疾病，分子靶向治療是近年來肺癌治療的新突破。轉錄因子 FOXM1與腫瘤的發(fā)生發(fā)展過程密切相關，并作為抑癌性分子FOXO3a及多種抗腫瘤藥物的靶點。但目前關于FOXM1對表皮生長因子酪氨酸激酶抑制劑在肺癌靶向治療中的影響及分子機制尚不清楚。
　　研究方法：
　　1. AG1478處理人肺癌細胞，CCK-8法檢測細胞增殖狀態(tài)；RT-PCR、Western blot及熒光素酶報

2、告系統(tǒng)法分別檢測FOXM1 mRNA、蛋白表達及其啟動子活性的改變。
　　2. FOXM1 siRNA轉染人肺癌細胞，Western blot法檢測FOXM1蛋白表達變化；流式細胞計數(shù)、克隆形成試驗及CCK-8法分別檢測細胞周期分布、克隆形成能力及AG1478藥物敏感性的改變。
　　3. AG1478處理人肺癌細胞，Western blot及細胞免疫熒光法檢測FOXO3a分子的亞細胞分布。FOXO3a siRNA及pEGFP

3、-N1-FOXO3a重組質粒轉染細胞，Western blot法檢測FOXM1表達的改變；ChIP法分析FOXO3a與FOXM1基因啟動子的結合。
　　研究結果：
　　1. AG1478抑制肺癌細胞的增殖，下調FOXM1表達及其啟動子活性，并促進活化FOXO3a的表達。
　　2.沉默F(xiàn)OXM1后，F(xiàn)OXM1 mRNA及蛋白表達明顯下降，其下游CyclinB1、c-Myc、Bcl-2隨之下降，而p21、Cleaved-P

4、ARP則被上調；細胞克隆形成能力明顯降低，細胞周期阻滯在G2/M期；并明顯增加細胞對AG1478的藥物敏感性。
　　3. AG1478誘導FOXO3a的胞核重定位。沉默F(xiàn)OXO3a后，F(xiàn)OXM1 mRNA的表達明顯增加，且AG1478介導的FOXM1表達抑制被部分削弱；過表達FOXO3a后，F(xiàn)OXM1的蛋白水平明顯下降。FOXO3a與FOXM1基因啟動子-1561~-1553序列結合。
　　研究結論：
　　在人肺癌細胞