LASS2-TMSG-1基因過表達(dá)對(duì)人肺癌細(xì)胞的影響.pdf

1、目的：
　　探討人源性長壽保障基因2（homo sapiens longevity assurance homologue2，LASS2即TMSG-1）對(duì)人肺癌細(xì)胞增殖、侵襲和遷移能力的影響及其調(diào)控機(jī)制是否通過影響V-ATP酶而實(shí)現(xiàn)。
　　方法：
　　為探討LASS2/TMSG-1基因?qū)θ朔伟┘?xì)胞增殖、侵襲、遷移能力的影響及其作用機(jī)制，本課題實(shí)驗(yàn)采用人肺巨細(xì)胞癌高轉(zhuǎn)移潛能細(xì)胞亞系95D細(xì)胞，課題內(nèi)容分為兩部分，第一部分

2、研究LASS2/TMSG-1基因?qū)θ朔伟┘?xì)胞95D生物學(xué)功能的影響：將前期已構(gòu)建好并冷凍保存的PcDNA3-TMSG-1質(zhì)粒通過脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染法瞬時(shí)轉(zhuǎn)染入細(xì)胞，使外源性LASS2/TMSG-1基因在細(xì)胞內(nèi)過表達(dá)即LASS2/TMSG-1group，同時(shí)設(shè)立轉(zhuǎn)染空白質(zhì)粒的negative group和沒轉(zhuǎn)染質(zhì)粒的untreated group。通過western blot、細(xì)胞免疫組化鑒定轉(zhuǎn)染效率和表達(dá)情況；MTT實(shí)驗(yàn)、trans well及

3、細(xì)胞劃痕修復(fù)實(shí)驗(yàn)檢測LASS2/TMSG-1基因?qū)θ朔伟┘?xì)胞增殖、侵襲、遷移能力的影響。第二部分探討LASS2/TMSG-1基因與質(zhì)子泵V-ATPase相互作用的機(jī)制：通過western blot、PCR檢測該基因?qū)TP6L表達(dá)活性的影響；通過V-ATPase活性檢測實(shí)驗(yàn)、細(xì)胞外H+濃度檢測實(shí)驗(yàn)探討該基因?qū)|(zhì)子泵V-ATPase的活性的影響；通過western blot、明膠酶譜、細(xì)胞分泌MMP2/9檢測實(shí)驗(yàn)探討該基因?qū)|(zhì)金屬蛋白酶

4、2/9的表達(dá)和分泌活性的影響。
　　結(jié)果：
　　第一部分的體外生物學(xué)功能實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明LASS2/TMSG-1 group95D細(xì)胞的增殖（P＜0.05）、侵襲（P＜0.05)和遷移（P＜0.05）能力均低于另外兩組且差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，說明LASS2/TMSG-1基因能抑制人肺癌細(xì)胞95D的增殖、侵襲和遷移，初步推斷該基因是一種腫瘤轉(zhuǎn)移抑制基因。第二部分機(jī)制探討的實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示LASS2/TMSG-1 group的ATP6L表

5、達(dá)活性降低（P＜0.05），細(xì)胞分泌V-ATPase活性降低（P＜0.05），細(xì)胞外H+濃度降低（P＜0.05），基質(zhì)蛋白水解酶的表達(dá)及活性均降低（P均＜0.05），提示LASS2/TMSG-1基因可能與質(zhì)子泵V-ATPase相互作用，通過調(diào)控V-ATP酶的C亞基ATP6L來抑制腫瘤細(xì)胞的侵襲轉(zhuǎn)移。
　　結(jié)論：
　　綜上所述，本實(shí)驗(yàn)研究證實(shí)了LASS2/TMSG-1基因可以抑制人肺癌細(xì)胞的增殖、侵襲和遷移能力，其機(jī)制可能是L