LASS2-TMSG-1基因過表達對人肺癌細胞的影響.pdf

1、目的：
　　探討人源性長壽保障基因2（homo sapiens longevity assurance homologue2，LASS2即TMSG-1）對人肺癌細胞增殖、侵襲和遷移能力的影響及其調(diào)控機制是否通過影響V-ATP酶而實現(xiàn)。
　　方法：
　　為探討LASS2/TMSG-1基因?qū)θ朔伟┘毎鲋?、侵襲、遷移能力的影響及其作用機制，本課題實驗采用人肺巨細胞癌高轉(zhuǎn)移潛能細胞亞系95D細胞，課題內(nèi)容分為兩部分，第一部分

2、研究LASS2/TMSG-1基因?qū)θ朔伟┘毎?5D生物學功能的影響：將前期已構(gòu)建好并冷凍保存的PcDNA3-TMSG-1質(zhì)粒通過脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染法瞬時轉(zhuǎn)染入細胞，使外源性LASS2/TMSG-1基因在細胞內(nèi)過表達即LASS2/TMSG-1group，同時設(shè)立轉(zhuǎn)染空白質(zhì)粒的negative group和沒轉(zhuǎn)染質(zhì)粒的untreated group。通過western blot、細胞免疫組化鑒定轉(zhuǎn)染效率和表達情況；MTT實驗、trans well及

3、細胞劃痕修復實驗檢測LASS2/TMSG-1基因?qū)θ朔伟┘毎鲋场⑶忠u、遷移能力的影響。第二部分探討LASS2/TMSG-1基因與質(zhì)子泵V-ATPase相互作用的機制：通過western blot、PCR檢測該基因?qū)TP6L表達活性的影響；通過V-ATPase活性檢測實驗、細胞外H+濃度檢測實驗探討該基因?qū)|(zhì)子泵V-ATPase的活性的影響；通過western blot、明膠酶譜、細胞分泌MMP2/9檢測實驗探討該基因?qū)|(zhì)金屬蛋白酶

4、2/9的表達和分泌活性的影響。
　　結(jié)果：
　　第一部分的體外生物學功能實驗結(jié)果表明LASS2/TMSG-1 group95D細胞的增殖（P＜0.05）、侵襲（P＜0.05)和遷移（P＜0.05）能力均低于另外兩組且差異具有統(tǒng)計學意義，說明LASS2/TMSG-1基因能抑制人肺癌細胞95D的增殖、侵襲和遷移，初步推斷該基因是一種腫瘤轉(zhuǎn)移抑制基因。第二部分機制探討的實驗結(jié)果顯示LASS2/TMSG-1 group的ATP6L表

5、達活性降低（P＜0.05），細胞分泌V-ATPase活性降低（P＜0.05），細胞外H+濃度降低（P＜0.05），基質(zhì)蛋白水解酶的表達及活性均降低（P均＜0.05），提示LASS2/TMSG-1基因可能與質(zhì)子泵V-ATPase相互作用，通過調(diào)控V-ATP酶的C亞基ATP6L來抑制腫瘤細胞的侵襲轉(zhuǎn)移。
　　結(jié)論：
　　綜上所述，本實驗研究證實了LASS2/TMSG-1基因可以抑制人肺癌細胞的增殖、侵襲和遷移能力，其機制可能是L