LASS2-TMSG-1 基因誘導(dǎo)人肺癌細(xì)胞發(fā)生凋亡的機(jī)制研究.pdf

1、目的：研究過(guò)表達(dá)及沉默LASS2/TMSG-1基因?qū)θ朔伟┘?xì)胞系高轉(zhuǎn)移潛能亞系95D細(xì)胞和低轉(zhuǎn)移潛能亞系95C細(xì)胞是否發(fā)生細(xì)胞凋亡及其相關(guān)機(jī)制。
　　方法：運(yùn)用慢病毒轉(zhuǎn)染法將靶向LASS2/TMSG-1基因過(guò)表達(dá)慢病毒載體（8649）和LASS2/TMSG-1基因沉默慢病毒載體(30011-1)分別轉(zhuǎn)入到95D和95C細(xì)胞；采用流式細(xì)胞術(shù)觀察腫瘤細(xì)胞的凋亡能力；應(yīng)用 CCK-8實(shí)驗(yàn)法檢測(cè)腫瘤細(xì)胞的體外增殖能力；利用Western

2、Blot檢測(cè)LASS2/TMSG-1、Bcl-2、Bax、Cytochroem C、Caspase-9、Caspase-3、p-P38MAPK在細(xì)胞中的表達(dá)水平。統(tǒng)計(jì)學(xué)分析采用SPSS21.0統(tǒng)計(jì)軟件，P＜0.05認(rèn)為差別有顯著性，有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　結(jié)果：⑴在95D細(xì)胞中，LASS2/TMSG-1過(guò)表達(dá)組經(jīng)Western Blot檢測(cè)細(xì)胞內(nèi)LASS2/TMSG-1蛋白水平明顯升高；流式細(xì)胞術(shù)測(cè)定顯示LASS2/TMSG-1基因過(guò)

3、表達(dá)能夠促進(jìn)細(xì)胞發(fā)生凋亡；CCK-8測(cè)定顯示LASS2/TMSG-1基因過(guò)表達(dá)可以抑制細(xì)胞增殖；Western Blot分析表明LASS2/TMSG-1基因過(guò)表達(dá)使Bcl-2的表達(dá)減少，誘導(dǎo)Cytochroem C從線粒體釋放，促進(jìn)Caspase-9和Caspase-3的激活和神經(jīng)酰胺下游效應(yīng)分子P38MAPK的活化；與正常組和陰性對(duì)照組相比有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。⑵在95C細(xì)胞中，LASS2/TMSG-1沉默組經(jīng)Western

4、Blot檢測(cè)細(xì)胞內(nèi) LASS2/TMSG-1基因蛋白水平明顯下降；流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)LASS2/TMSG-1基因沉默組細(xì)胞的凋亡率明顯下降；CCK-8測(cè)定顯示沉默LASS2/TMSG-1基因能促進(jìn)細(xì)胞增殖；Western Blot分析表明沉默LASS2/TMSG-1基因?qū)е翨cl-2升高，抑制Cytochroem C從線粒體釋放，并阻止Caspase-9和Caspase-3的活化和神經(jīng)酰胺下游效應(yīng)分子P38MAPK的活化，與正常組和陰性對(duì)照