紫草素誘導(dǎo)人絨毛膜癌細(xì)胞凋亡及其機(jī)制的探討.pdf

1、尋找低毒高效的天然抗腫瘤藥物一直是近年來抗腫瘤藥物研究的熱點(diǎn)。紫草素已證實(shí)具有多方面的藥用價(jià)值，且對(duì)人的正常細(xì)胞毒性較小。已有實(shí)驗(yàn)研究表明紫草素能抑制腫瘤細(xì)胞的生長，但對(duì)人絨癌細(xì)胞的抑制作用及其機(jī)制未見報(bào)道。 本研究對(duì)紫草素誘導(dǎo)人絨毛膜癌細(xì)胞凋亡的規(guī)律及其分子機(jī)制進(jìn)行了一定的探討。研究發(fā)現(xiàn)，紫草素能夠激活細(xì)胞凋亡的信號(hào)通路，進(jìn)而誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡。凋亡過程與Caspase-3相關(guān)，并且MAPK家族成員的激活受到抑制。 方法：

2、 1、MTT法測(cè)定紫草素對(duì)絨癌細(xì)胞JEG-3、JAR增殖的半數(shù)抑制濃度。 2、光學(xué)顯微鏡下觀察細(xì)胞形態(tài)學(xué)變化。 3、Hochest33258熒光染色法觀察凋亡細(xì)胞形態(tài)學(xué)變化。 4、流式細(xì)胞術(shù)PI單染、Annexin V/PI雙染檢測(cè)檢細(xì)胞凋亡。 5、Westem Blot檢測(cè)紫草素作用絨癌細(xì)胞后凋亡相關(guān)蛋白PARP、Caspase-3、p-ERK、p-JNK、p38、p-AKT、pSTAT3、AR的

3、表達(dá)。 結(jié)果： 紫草素對(duì)絨癌細(xì)胞JEG-3、JAR都具有明顯的生長抑制作用，其半數(shù)抑制濃度分別為JEG-3(ICso:6.3±0.6μM)，JAR(ICso:9.2±0.8μM)，抑制效果與紫草素作用時(shí)間、劑量呈正相關(guān)。而紫草素對(duì)人正常胎腎細(xì)胞HEK-293及人胎肝細(xì)胞L-02的抑制率不到1％。不同濃度的紫草素作用JEG-3細(xì)胞24小時(shí)可見明顯形態(tài)學(xué)變化：細(xì)胞變圓，部分細(xì)胞不再貼壁而成懸浮狀態(tài)，內(nèi)溶物凝集，透光性差，48

4、小時(shí)后細(xì)胞起泡，大量細(xì)胞懸浮，死亡，產(chǎn)生大量細(xì)胞碎片。Hochest33258熒光染色實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)紫草素能引起細(xì)胞核染色質(zhì)斷裂、邊集、濃縮，產(chǎn)生凋亡特征。PI單染流式細(xì)胞術(shù)分析結(jié)果出現(xiàn)亞二倍體峰，且隨著濃度和時(shí)間增加，峰值出現(xiàn)明顯變化，呈增加趨勢(shì)。Annexin- V/PI雙染結(jié)果顯示O、5、10(μM)紫草素作用JEG-3細(xì)胞12小時(shí)后，細(xì)胞凋亡率分別為7.3％、29.4％、48.8％。 為了闡明紫草素誘導(dǎo)絨癌細(xì)胞JEG-3凋亡的

5、相關(guān)信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路，我們檢測(cè)Caspase-3、PARP、 p-ERK、p-JNK、p38、p-AKT、pSTAT3、AR蛋白等的表達(dá)及活化情況。結(jié)果顯示紫草素能夠激活Caspase-3，進(jìn)一步檢測(cè)Caspase-3的底物PARP蛋白，檢測(cè)到86KD的剪切片斷。此外，紫草素能夠下調(diào)AR表達(dá)，降低AKT、STAT3、ERK、JNK等的磷酸化水平。初步的作用機(jī)制研究表明，紫草素經(jīng)Caspase-3途徑誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞凋亡，抑制促細(xì)胞分裂原激活蛋白