紫草素誘導(dǎo)CNE-2細(xì)胞自噬及其機(jī)制的研究.pdf

1、目的:
　　本課題主要采用不同濃度紫草素作用于人鼻咽癌CNE-2細(xì)胞株，檢測CNE-2細(xì)胞株的自噬率、Beclin1及Bcl-2表達(dá)，探討紫草素誘導(dǎo)CNE-2細(xì)胞株的自噬作用，以及其與Beclin1及Bcl-2表達(dá)的相關(guān)性，揭示鼻咽癌發(fā)生發(fā)展的可能機(jī)制，為鼻咽癌治療提供新的靶點(diǎn)。
　　方法:
　　不同濃度紫草素作用于人鼻咽癌CNE-2細(xì)胞株，分別于24h、48 h、72 h后三個(gè)時(shí)間進(jìn)行不同指標(biāo)的檢測，MTT法檢測各組

2、CNE-2細(xì)胞株的抑制率;倒置顯微鏡下觀察各組CNE-2細(xì)胞的形態(tài)學(xué)特征;MDC染色激光共聚焦熒光顯微鏡下觀察各組CNE-2細(xì)胞自噬囊泡;流式細(xì)胞術(shù)檢測各組的自噬率;RT-PCR法檢測Bcl-2和Beclin1 mRNA的表達(dá)。
　　結(jié)果:
　　不同濃度的紫草素作用下CNE-2細(xì)胞具有細(xì)胞生長抑制作用，并呈時(shí)間和濃度依賴性。倒置顯微鏡下見到細(xì)胞形態(tài)顯著改變，對照組可見細(xì)胞質(zhì)少量空泡形成，實(shí)驗(yàn)組隨著紫草素濃度的增加空泡也隨著增

3、加、增多;通過MDC染色激光共聚焦熒光顯微鏡檢測，隨著藥物濃度的增大而CNE-2細(xì)胞熒光強(qiáng)度也逐漸增加，且應(yīng)用流式細(xì)胞術(shù)測定不同濃度紫草素誘導(dǎo)CNE-2細(xì)胞的自噬率也逐漸增高。實(shí)時(shí)定量RT-PCR法顯示自噬基因Beclin1在紫草素作用的表達(dá)處于較高水平;而凋亡相關(guān)基因Bcl-2在紫草素的表達(dá)具有下調(diào)作用。
　　結(jié)論:
　　紫草素對人鼻咽癌CNE-2細(xì)胞具有顯著的抑制作用，具有抗腫瘤的活性。通過自噬特異性熒光染色劑MDC及流