紫草素誘導(dǎo)K562細(xì)胞凋亡及其對VEGF、MMP-9表達(dá)的影響.pdf

1、目的：觀察紫草素對白血病 K562細(xì)胞的增殖以及凋亡作用的影響，并探討其對K562細(xì)胞血管內(nèi)皮生成因子（VEGF）、基質(zhì)金屬蛋白酶-9（MMP-9）表達(dá)的影響，研究紫草素抗白血病血管新生的可能機(jī)制，試圖為白血病治療提供新的思路。
　　方法：MTT比色法檢測不同濃度紫草素作用K562細(xì)胞24、48、72小時(shí)后細(xì)胞的增殖及抑制情況。根據(jù)結(jié)果及參考文獻(xiàn)，選定5μmol/L、10μmol/L、25μmol/L、50μmol/L紫草素進(jìn)行后

2、續(xù)實(shí)驗(yàn)，并設(shè)立空白組及溶媒組。Wright-Giemsa染色后油鏡下觀察紫草素作用K562細(xì)胞48h、72h后細(xì)胞形態(tài)變化。流式細(xì)胞儀測定K562細(xì)胞的凋亡情況及周期變化。RT-PCR檢測K562細(xì)胞VEGF、MMP-9mRNA表達(dá)水平。酶聯(lián)免疫吸附法（ELISA）測定K562細(xì)胞上清液MMP-9的含量。結(jié)果：1、相同濃度的紫草素作用于K562細(xì)胞后，隨著時(shí)間延長，細(xì)胞增殖的抑制率增加，具有時(shí)間依賴性（P<0.05）；且隨著紫草素濃度加

3、大，K562細(xì)胞的增殖抑制率也提高，具有劑量依賴性（P<0.05）。溶媒組與空白組相比，K562細(xì)胞增殖無顯著性差異（P>0.05）。
　　2、Wright-Giemsa染色后油鏡下觀察紫草素作用48h、72h后，K562細(xì)胞出現(xiàn)體積變小，染色質(zhì)凝聚，顏色變深，還可見核固縮、核碎裂等凋亡改變。
　　3、流式細(xì)胞儀檢測發(fā)現(xiàn)紫草素可以誘導(dǎo)K562細(xì)胞周期阻滯在G0/G1期。5μmol/L組G0/G1期、S期細(xì)胞變化與空白組相比，

4、差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）。從10μmol/L組開始，隨著紫草素濃度加大及時(shí)間延長，K562細(xì)胞處在 G0/G1期的比例增加，S期比例減少，與空白組比較均有差異（P<0.05）。而處在G2/M期的K562細(xì)胞比例變化不大。
　　4、RT-PCR顯示，5μmol/L、10μmol/L、25μmol/L、50μmol/L紫草素作用K562細(xì)胞48h與空白組比較，均可以下調(diào)VEGFmRNA表達(dá)（P<0.05），且下調(diào)VEGFmRN

5、A表達(dá)的效果與濃度相關(guān)。
　　5、RT-PCR及ELISA結(jié)果顯示，5μmol/L、10μmol/L、25μmol/L、50μmol/L紫草素作用K562細(xì)胞48h可以呈濃度依賴性下調(diào)MMP-9mRNA表達(dá)及MMP-9濃度水平（P<0.05）。
　　結(jié)論：1、紫草素濃度在5-50μmol/L對白血病K562細(xì)胞增殖有抑制作用，并且呈一定的量效時(shí)效關(guān)系。
　　2、紫草素能誘導(dǎo)K562細(xì)胞凋亡，并且誘導(dǎo)K562細(xì)胞周期阻滯