莪術(shù)瓜蔞湯含藥血清誘導(dǎo)人肺癌細(xì)胞凋亡的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、目的:探討莪術(shù)瓜蔞湯含藥血清對(duì)人肺癌細(xì)胞凋亡的誘導(dǎo)作用及其抗癌機(jī)制,為臨床應(yīng)用莪術(shù)瓜蔞湯治療肺癌提供理論依據(jù).方法:用不同劑量的莪術(shù)瓜蔞湯水煎劑給家兔灌胃,制備高、中、低劑量莪術(shù)瓜蔞湯含藥血清;并用相同的方法同時(shí)制備維甲酸血清和生理鹽水對(duì)照血清.以高、中、低劑量莪術(shù)瓜蔞湯含藥血清,維甲酸血清和對(duì)照血清分別作用于人肺巨細(xì)胞癌低轉(zhuǎn)移亞系LH7(PGLH7):采用MTT法觀察莪術(shù)瓜蔞湯含藥血清對(duì)PGLH7細(xì)胞生長(zhǎng)的抑制作用,流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)其對(duì)

2、PGLH7細(xì)胞周期的變化;倒置顯微鏡、光學(xué)顯微鏡和激光共聚焦掃描顯微鏡觀察PGLH7細(xì)胞凋亡的形態(tài)學(xué)特征并進(jìn)行凋亡細(xì)胞鑒定;流式細(xì)胞儀定量觀察莪術(shù)瓜蔞湯含藥血清的給藥劑量、作用時(shí)間與PGLH7凋亡的量效關(guān)系.結(jié)果:(1)采用MTT法觀察莪術(shù)瓜蔞湯含藥血清對(duì)PGLH7細(xì)胞增殖的抑制作用,其中高劑量血清組與對(duì)照血清組之間的吸光度差異有顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01);隨著作用時(shí)間的延長(zhǎng),其吸光度逐漸降低,抑制率逐漸增高.(2)采用流式細(xì)胞儀觀

3、察莪術(shù)瓜簍湯的含藥血清對(duì)PGLH7細(xì)胞周期的影響,其中中劑量血清組、高劑量血清組的S期細(xì)胞所占比例與對(duì)照血清組之間的差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(中劑量血清組P<0.05,高劑量血清組P<0.01);隨著作用時(shí)間的延長(zhǎng),其S期細(xì)胞所占的比例明顯減少,有顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P<0.01).(3)倒置顯微鏡觀察,可見(jiàn)經(jīng)莪術(shù)瓜簍湯含藥血清處理后,PGLH7細(xì)胞變小、變圓,懸浮于培養(yǎng)液中,胞漿透亮度下降,核顏色加深,折光性增強(qiáng);肛染色光鏡觀察,可見(jiàn)經(jīng)莪術(shù)瓜簍湯

4、含藥血清處理后,PGLH7細(xì)胞體積縮小,變圓,胞膜皺縮,胞核內(nèi)染色質(zhì)密度增高,呈半月形凝集在核膜周邊,顯示典型的凋亡細(xì)胞特點(diǎn).(4)應(yīng)用Annexin V聯(lián)合PI雙染法染色,激光共聚焦掃描顯微鏡觀察,可見(jiàn)經(jīng)莪術(shù)瓜簍湯含藥血清作用的PGLH7細(xì)胞中,凋亡早期細(xì)胞呈Annexin V高染而PI低染,細(xì)胞膜呈綠色而細(xì)胞核不著色;凋亡中,晚期細(xì)胞則Annexin V和PI均為高染,細(xì)胞膜呈綠色而細(xì)胞核呈紅色;部分細(xì)胞的核呈碎片狀或梅花狀,為典型

5、的細(xì)胞凋亡形態(tài).(5)采用Annexin V-FITC和PI雙標(biāo)記,流式細(xì)胞儀定量檢測(cè)PGLH7細(xì)胞凋亡率,莪術(shù)瓜簍湯含藥血清作用24 h時(shí),高劑量血清組與對(duì)照血清組之間的凋亡率差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05);含藥血清作用48h時(shí),中劑量、高劑量血清組與對(duì)照血清組之間的凋亡率差異都有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(中劑量組P<0.05,高劑量組P<0.01);同時(shí)中劑量、高劑量血清組隨著作用時(shí)間的延長(zhǎng),凋亡細(xì)胞所占的比例明顯增加,有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P<0.0