蟲草素通過下調LASP1的表達抑制膽囊癌細胞增殖轉移.pdf

1、目的：研究蟲草素在膽囊癌細胞中的生物學功能；篩選蟲草素在膽囊癌細胞中的作用靶點；探討該作用靶點在膽囊癌組織和細胞的表達及生物學功能和機制。
　　方法：通過CCK8實驗初步驗證蟲草素是否有抑制膽囊細胞的作用并篩選藥物濃度。通過增殖、克隆形成、凋亡、周期分布、線粒體膜電位檢測等實驗檢測蟲草素對膽囊癌細胞GBC-SD和N O Z的生物學功能影響；通過Westemblot實驗檢測相關蛋白的變化，初步探討蟲草素的作用機制；通過裸小鼠皮下瘤模

2、型檢測蟲草素體內對膽囊癌細胞生物學行為的影響。再通過基因芯片篩選蟲草素作用前后膽囊癌細胞基因差異表達，篩選蟲草素的作用靶點，免疫組織化學染色、qRT-PCR實驗驗證該靶點在膽囊癌組織和細胞中表達水平。通過siRNA干擾該靶基因，CCK-8增殖實驗、克隆形成、劃痕愈合、Transwell小室侵襲、裸小鼠皮下成瘤能力、Westernblot實驗來檢測該祀點體內、外兌膽囊癌細胞的生物學功能的影響及可能的信號通路。并過表達該基因，探討是否可阻斷

3、或者削弱蟲草素對膽囊癌細胞生物學行為的影響。
　　結果：蟲草組的最佳作用濃度為GBC-SD細胞：（0,100,200,400,800μg/ml; NOZ細胞:0,10,0,10,20,40,60μg/ml.以上濃度作用后，膽囊癌細胞增殖、克隆形成能力明顯下降，凋亡細胞數(shù)量顯著增加，周期分布S期細胞數(shù)明顯增多，線粒體膜電位顯著下降，凋亡和周期蛋白發(fā)生異常，NOZ細胞體內成瘤能力明顯下降。基因芯片篩選顯示LASP-1可能是蟲草素作用靶