蟲草素通過下調(diào)LASP1的表達(dá)抑制膽囊癌細(xì)胞增殖轉(zhuǎn)移.pdf

1、目的：研究蟲草素在膽囊癌細(xì)胞中的生物學(xué)功能；篩選蟲草素在膽囊癌細(xì)胞中的作用靶點；探討該作用靶點在膽囊癌組織和細(xì)胞的表達(dá)及生物學(xué)功能和機(jī)制。
　　方法：通過CCK8實驗初步驗證蟲草素是否有抑制膽囊細(xì)胞的作用并篩選藥物濃度。通過增殖、克隆形成、凋亡、周期分布、線粒體膜電位檢測等實驗檢測蟲草素對膽囊癌細(xì)胞GBC-SD和N O Z的生物學(xué)功能影響；通過Westemblot實驗檢測相關(guān)蛋白的變化，初步探討蟲草素的作用機(jī)制；通過裸小鼠皮下瘤模

2、型檢測蟲草素體內(nèi)對膽囊癌細(xì)胞生物學(xué)行為的影響。再通過基因芯片篩選蟲草素作用前后膽囊癌細(xì)胞基因差異表達(dá)，篩選蟲草素的作用靶點，免疫組織化學(xué)染色、qRT-PCR實驗驗證該靶點在膽囊癌組織和細(xì)胞中表達(dá)水平。通過siRNA干擾該靶基因，CCK-8增殖實驗、克隆形成、劃痕愈合、Transwell小室侵襲、裸小鼠皮下成瘤能力、Westernblot實驗來檢測該祀點體內(nèi)、外兌膽囊癌細(xì)胞的生物學(xué)功能的影響及可能的信號通路。并過表達(dá)該基因，探討是否可阻斷

3、或者削弱蟲草素對膽囊癌細(xì)胞生物學(xué)行為的影響。
　　結(jié)果：蟲草組的最佳作用濃度為GBC-SD細(xì)胞：（0,100,200,400,800μg/ml; NOZ細(xì)胞:0,10,0,10,20,40,60μg/ml.以上濃度作用后，膽囊癌細(xì)胞增殖、克隆形成能力明顯下降，凋亡細(xì)胞數(shù)量顯著增加，周期分布S期細(xì)胞數(shù)明顯增多，線粒體膜電位顯著下降，凋亡和周期蛋白發(fā)生異常，NOZ細(xì)胞體內(nèi)成瘤能力明顯下降?；蛐酒Y選顯示LASP-1可能是蟲草素作用靶