Hsa-miR-29c調控人膽囊癌細胞增殖轉移的機制研究.pdf

1、目的：
　　膽囊癌是膽道系統(tǒng)最常見的惡性腫瘤，其發(fā)病率占消化道腫瘤的7位。由于膽囊癌細胞能較快地通過直接浸潤、淋巴轉移、血運轉移等方式在早期發(fā)生廣泛擴散，大多數(shù)患者發(fā)現(xiàn)時已是中晚期，根治性手術切除率低，預后極差，中位生存期小于1年。MicroRNA(miRNA)是一類新發(fā)現(xiàn)的非編碼小RNA分子，它們能夠通過與靶基因的mRNA分子從而起到對靶基因的調控作用。已有大量報道發(fā)現(xiàn)這種小RNA分子幾乎參與調控了細胞生命周期中所以的關鍵步驟，

2、但在膽囊癌領域研究較少。
　　方法：
　　1、通過高通量Agilent人類miRNA芯片(V.19.0)檢測膽囊癌組織及其相對應的癌旁組織中miRNA的表達譜，選擇表達量顯著異常的miRNA作為研究對象。
　　2、通過使用Real-Time PCR方法檢測40例膽囊癌組織及其癌旁組織中miR-29c-5p的表達量發(fā)現(xiàn)，miR-29c-5p在腫瘤組織中異常低表達，同時發(fā)現(xiàn)miR-29c-5p與膽囊癌患者的預后密切相關。<

3、br>　　3、體內體外實驗發(fā)現(xiàn)，miR-29c-5p調控膽囊癌細胞增殖及抑制其浸潤轉移的能力，這一現(xiàn)象可能是由miR-29c-5p抑制膽囊癌細胞上皮間質轉化(EMT)所調控的。
　　4、MiR-29c-5p的靶基因的確定:結合miRDB和miRanda等生物信息學預測與雙熒光素酶報告基因方法檢測miR-29c-5p對靶基因3'UTR的結合作用，Western blot在蛋白水平檢測其對靶基因的抑制作用，免疫組化檢測SPOCK1基因

4、和膽囊癌患者預后的關系。
　　5、SPOCK1作為miR-29c-5p的靶基因在miR-29c-5p的生物學功能中的作用:SPOCK1在miR-29c-5p對膽囊癌細胞增殖和侵襲轉移中的作用—SPOCK1過表達質粒和miR-29c-5p共轉染后進行Transwell實驗;Western blot驗證EMT相關指標。
　　結果：
　　1、通過膽囊癌差異性表達檢測確定miR-29c-5p為核心的膽囊癌相關miRNA;

5、>　　2、體內體外實驗證明miR-29c-5p過表達通過調控EMT抑制膽囊癌細胞的侵襲轉移，并抑制膽囊癌細胞的增殖;
　　3、SPOCK1被證實為miR-29c-5p的靶基因;
　　4、SPOCK1在膽囊癌中起癌基因作用，并且在miR-29c-5p的抑癌作用中起關鍵作用。
　　結論：
　　MiR-29c-5p通過靶向SPOCK1在膽囊癌的生長和轉移中起關鍵作用，提示干預miR-29c-5p可能成為膽囊癌治療的重要