NDRG2基因在膽囊癌中的表達(dá)及其對膽囊癌細(xì)胞生長的影響.pdf

1、第一章NDRG2在膽囊癌組織中的表達(dá)、臨床病理和預(yù)后意義
　　目的:
　　檢測NDRG2蛋白在膽囊良、惡性疾病中的表達(dá)強(qiáng)度，并結(jié)合相關(guān)臨床病理資料，分析影響NDRG2蛋白表達(dá)的有關(guān)因素，初步探討NDRG2蛋白在膽囊良、惡性疾病發(fā)生發(fā)展過程中的作用和臨床意義。
　　方法:
　　收集內(nèi)蒙古包鋼醫(yī)院普外科2009年9月至2011年8月手術(shù)切除的膽囊癌標(biāo)本130例及其相應(yīng)癌旁組織。所以病例術(shù)前皆未經(jīng)過放、化療及其他輔助性

2、治療，且必須有完整的住院病歷資料。全部標(biāo)本皆采用常規(guī)石蠟包埋切片，免疫組化技術(shù)及Western Blot檢測標(biāo)本中NDRG2蛋白的表達(dá)強(qiáng)度。并統(tǒng)計(jì)分析病例的相關(guān)臨床病理資料，對相關(guān)因素進(jìn)行x2檢驗(yàn)。
　　結(jié)果:
　?、貼DRG2蛋白在膽囊癌中的表達(dá)明顯低于相應(yīng)癌旁組織(P＜0.005);
　?、贜DRG2蛋白在TNMⅡ期中的表達(dá)低于在TNMⅠ期中的表達(dá)(P=0.003)
　?、塾辛馨徒Y(jié)轉(zhuǎn)移和浸潤的膽囊癌，其NDR

3、G2蛋白陽性率明顯低于無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移或浸潤者(P=0.008)。
　　結(jié)論:
　　NDRG2蛋白在膽囊癌中顯著低表達(dá)，其表達(dá)強(qiáng)度與膽囊癌的分期、分級和臨床預(yù)后有密切關(guān)系;從癌前病變發(fā)展成膽囊癌的過程中，NDRG2蛋白可能發(fā)揮了重要作用，檢測其表達(dá)強(qiáng)度有助于在癌前病變階段早期發(fā)現(xiàn)膽囊癌。
　　第二章NDRG2真核表達(dá)載體構(gòu)建及穩(wěn)定轉(zhuǎn)染GBC-SD細(xì)胞系的建立目的構(gòu)建人NDRG2真核表達(dá)載體，轉(zhuǎn)染GBC-SD細(xì)胞，建立穩(wěn)定轉(zhuǎn)

4、染的GBC-SD細(xì)胞系。方法采用PCR方法，以人膽囊癌組織cDNA文庫為模板擴(kuò)增人NDRG2基因的全長cDNA編碼區(qū)序列，利用DNA重組技術(shù)將其定向插入到真核表達(dá)載體pcDNA3.1，經(jīng)酶切和測序鑒定后，用脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染法轉(zhuǎn)染GBC-SD細(xì)胞，通過G418篩選，建立穩(wěn)定轉(zhuǎn)染的GBC-SD細(xì)胞系，用RT PCR、Western blot檢測NDRG2的表達(dá)。結(jié)果構(gòu)建了pcDNA3.1/NDRG2真核表達(dá)載體，建立了穩(wěn)定轉(zhuǎn)染的GBC-SD細(xì)胞系

5、，并成功地表達(dá)了目的基因。結(jié)論真核表達(dá)載體成功構(gòu)建和穩(wěn)定轉(zhuǎn)染GBC-SD細(xì)胞系的建立為進(jìn)一步研究NDRG2的功能奠定了良好的實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ)。
　　第三章NDRG2基因?qū)θ四懩野┘?xì)胞株GBC-SD生物學(xué)特性的影響。
　　目的:觀察NDRG2重組載體在體內(nèi)、外對GBC-SD生長的影響，以探討NDRG2基因與膽囊癌之間的相關(guān)性，為探索NDRG2真核表達(dá)載體作為膽囊癌基因治療靶點(diǎn)提供思路。
　　方法:采用MTT及流式細(xì)胞術(shù)檢測GBC

6、-SD、GBC-SD-Ve及GBC-SD-NDRG2三組中細(xì)胞周期、凋亡率及細(xì)胞增殖等生物學(xué)行為的變化;將三組細(xì)胞接種裸鼠皮下成瘤，建立裸鼠異體移植膽囊癌模型，觀察瘤體生長速度及瘤體大小，免疫組化法檢測瘤體組織中NDRG2基因的蛋白表達(dá)，評價(jià)重組載體pcDNA3.1-NDRG2對膽囊癌細(xì)胞GBC-SD裸鼠體內(nèi)致瘤活性及生長活性的影響。
　　結(jié)果:重組載體pcDNA3.1-NDRG2轉(zhuǎn)染GBC-SD細(xì)胞形成抗性克隆后，與未轉(zhuǎn)染組相比

7、，G2/S期細(xì)胞比例明顯增多，G1期細(xì)胞比例明顯減少，凋亡率明顯增高，細(xì)胞生長速度明顯減慢，細(xì)胞抑制率明顯增高，表明重組載體在體外能抑制GBC-SD細(xì)胞增殖;建立裸鼠異體移植膽囊癌模型后，三組的成瘤潛伏期均為5天，4周后處死裸鼠發(fā)現(xiàn)，GBC-SD組細(xì)胞在裸鼠體內(nèi)生長較GBC-SD-NDRG2組細(xì)胞生長快，兩組平均瘤體體積分別為384.17±72.84和178.13±29.75mm3，抑瘤率為50.0％，瘤體組織內(nèi)NDRG2基因的蛋白表達(dá)