胃癌微環(huán)境中TGF-β1通過調(diào)節(jié)TAM中mir-155的表達(dá)影響其表型.pdf

1、目的:研究胃癌微環(huán)境中TGF-β1對(duì)腫瘤相關(guān)巨噬細(xì)胞中miR-155的表達(dá)的影響，以及miR-155的表達(dá)變化對(duì)TAM表型的影響，以探尋胃癌腫瘤相關(guān)巨噬細(xì)胞表型改變的可能機(jī)制。
　　方法:
　　1、為了觀察胃癌組織中TGF-β1的表達(dá)與M2型巨噬細(xì)胞的浸潤(rùn)是否具有相關(guān)性，用免疫組織化學(xué)的方法檢測(cè)人胃癌組織和正常胃組織中TGF-β1和M2型巨噬細(xì)胞表面分子CD163的表達(dá)情況。
　　2、為了明確胃癌腫瘤相關(guān)巨噬細(xì)胞內(nèi)mi

2、R-155的表達(dá)變化及導(dǎo)致該變化的可能機(jī)制，進(jìn)行如下實(shí)驗(yàn):首先，佛波酯誘導(dǎo)人單核細(xì)胞株(THP-1)，使其分化為巨噬細(xì)胞，用胃癌腫瘤培養(yǎng)上清刺激巨噬細(xì)胞為胃癌腫瘤相關(guān)巨噬細(xì)胞。然后，用熒光定量PCR方法檢測(cè)巨噬細(xì)胞內(nèi)miR-155的表達(dá)，并比較巨噬細(xì)胞、胃癌腫瘤相關(guān)巨噬細(xì)胞以及用TGF-β1刺激的巨噬細(xì)胞中miR-155表達(dá)差異;最后，用TGF-β1受體阻斷劑刺激胃癌腫瘤相關(guān)巨噬細(xì)胞，熒光定量PCR方法檢測(cè)巨噬細(xì)胞內(nèi)miR-155的表達(dá)

3、。
　　3、觀察miR-155對(duì)巨噬細(xì)胞表型的影響:構(gòu)建miR-155真核表達(dá)質(zhì)粒，轉(zhuǎn)染巨噬細(xì)胞，ELISA方法檢測(cè)轉(zhuǎn)染后兩組細(xì)胞上清內(nèi)IL-10和IL-12的含量。
　　結(jié)果:
　　1、免疫組化結(jié)果表明，CD163作為巨噬細(xì)胞的表面分子標(biāo)記，主要表達(dá)在巨噬細(xì)胞的胞膜，而TGF-β1作為一種生長(zhǎng)因子，主要表達(dá)在腫瘤細(xì)胞的胞質(zhì)，同時(shí)胃癌組織中TGF-β1、CD163的表達(dá)都較癌旁正常組織高，統(tǒng)計(jì)學(xué)分析顯示CD163和TG

4、F-β1的表達(dá)呈正相關(guān)。
　　2、胃癌腫瘤上清刺激的巨噬細(xì)胞內(nèi)miR-155的表達(dá)較非腫瘤上清刺激巨噬細(xì)胞內(nèi)miR-155的表達(dá)降低，TGF-β1刺激的巨噬細(xì)胞中miR-155表達(dá)亦顯著降低;使用TGF-β1受體阻斷劑刺激后，胃癌腫瘤相關(guān)巨噬細(xì)胞內(nèi)miR-155的表達(dá)顯著升高。
　　3、巨噬細(xì)胞轉(zhuǎn)染miR-155后，ELISA檢測(cè)其分泌的IL-10的水平較轉(zhuǎn)染空載質(zhì)粒的巨噬細(xì)胞組低，而細(xì)胞上清中分泌的IL-12的水平較轉(zhuǎn)染空