豬Bic基因中Foxp3結(jié)合位點(diǎn)突變對(duì)miR-155表達(dá)影響探究.pdf

1、近年來(lái)抗病育種研究成為國(guó)內(nèi)外動(dòng)物遺傳育種專家高度關(guān)注的領(lǐng)域。中國(guó)地方豬種是抗病選育中親本的重要來(lái)源，因此從遺傳角度分析中國(guó)地方豬種與外來(lái)豬種的免疫差異對(duì)解析中國(guó)地方豬種是否具有較強(qiáng)抗逆性和豬的抗病新品種培育等是十分必要的。miR-155在免疫系統(tǒng)發(fā)生發(fā)育及調(diào)控中扮演重要角色，其在不同豬種中差異表達(dá)可能引起整個(gè)免疫系統(tǒng)的差異。本研究旨在利用染色質(zhì)免疫共沉淀技術(shù)探索豬Bic基因中與Foxp3蛋白相結(jié)合的區(qū)域，利用雙熒光素酶報(bào)告系統(tǒng)分析已發(fā)現(xiàn)

2、的大白豬和梅山豬中Bic基因的一個(gè)A/C突變導(dǎo)致的相應(yīng)序列與轉(zhuǎn)錄因子Foxp3的結(jié)合差異并在個(gè)體水平利用定量PCR對(duì)miR-155及其候選靶基因表達(dá)量進(jìn)行檢測(cè)，之后對(duì)miR-155的候選靶基因進(jìn)行雙熒光實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證。我們得到的具體結(jié)果如下:
　　(1)在實(shí)驗(yàn)室之前擴(kuò)增得到的5個(gè)SNP的基礎(chǔ)上，在大白豬和梅山豬中擴(kuò)增pre-miR-155前后約3kb左右的片段，通過(guò)測(cè)序得到20個(gè)疑似SNP的位點(diǎn)。
　　(2)初步確定豬中轉(zhuǎn)錄因子F

3、oxp3與pre-miR-155上游305bp左右的AAACA基序結(jié)合。
　　(3)由于SNP的存在不同豬種中的基序與Foxp3結(jié)合程度有差異，AAACC型片段的結(jié)合能力強(qiáng)于AAACA型片段，并且這種結(jié)合可能需要一定的條件，例如片段長(zhǎng)度或基序數(shù)量。
　　(4)轉(zhuǎn)錄因子Foxp3與兩種單倍型豬的Bic基因的結(jié)合能力的差異影響miR-155的表達(dá)，使CC型個(gè)體中的miR-155-5p和miR-155-3p的表達(dá)水平均高于AA型個(gè)