牡丹育種技術及雜交一代遺傳多樣性的研究.pdf

1、牡丹(Paeonia suffruticosa)為落葉灌木，最早作藥用，在我國已有2000多年的栽培歷史，是我國十大名花之一。本研究主要通過雜交育種、輻射育種兩種方法，以期培育出符合某種特殊需要的牡丹新品種;并以混合授粉方式產生的32份牡丹雜交一代為材料，5個父本品種為對照，利用SRAP分子標記技術進行雜交一代間遺傳多樣性及子代與親本間遺傳關系的研究，為今后牡丹選種、育種工作提供科學依據。
　　 主要研究結論如下:
　　

2、 1.采用人工授粉法，根據特定的育種目標設定雜交組合，共雜交了75個組合，結實率達到70％以上。
　　 2.輻射育種對牡丹種子發(fā)芽率、出苗率、苗高及根長的影響
　　 2.1不同劑量的60Co-γ輻射牡丹種子，對種子發(fā)芽率、出苗率有不同程度的影響。17.46Gy輻射處理發(fā)芽率最高，17.46-43.65Gy輻射處理與對照相比發(fā)芽率沒有明顯變化，43.65Gy以上則發(fā)芽率降低;17.46Gy輻射處理出苗率最高，與CK相比差異

3、顯著。不同劑量60Co-γ輻射處理出苗率均高于CK，這表明在一定劑量范圍，60Co-γ射線輻射牡丹種子可促進出苗。
　　 2.260Co-γ輻射牡丹種子后，苗高比CK均有不同程度的增加;17.46Gy輻射處理的苗高與CK差異顯著。表明60Co-γ輻射對牡丹幼苗生長具有明顯促進作用。
　　 2.3不同劑量60Co-γ輻射處理根長均高于對照，但差異不顯著。
　　 3.牡丹雜交一代遺傳多樣性的SRAP分析
　　

4、 3.1在正交試驗設計的基礎上得到了牡丹雜交一代最適的SRAP-PCR反應體系，即在25μL反應體系中，含有10－PCR Buffer2.5μL，Mg2+2.0 mmol/L，dNTPs0.25 mmol/L，Taq酶1.5 U，引物0.25μmol/L,模板DNA為2.0 ng/μL;其中各因素對PCR反應的影響從大到小依次為:Taq酶、dNTPs、引物、Mg2+、模板;擴增程序為94℃預變性5min，94℃變性1min、35℃退火1

5、 min、72℃延伸1min、進行5個循環(huán)，94℃變性1 min、50℃退火1min、72℃延伸1min、進行35個循環(huán)，72℃延伸10 min，4℃保存。
　　 3.2從100對引物中篩選出了能穩(wěn)定擴增的25對引物，利用這25對引物對試驗材料進行了擴增，共擴增出305個位點，其中300個為多態(tài)性位點，平均每對引物擴增出12.2個位點和12個多態(tài)性位點，多態(tài)性比率達98.36％;有效等位位點數(shù)在1.9046-1.4354之間，均

6、值為1.6998; Nei's遺傳多樣性指數(shù)(H)在0.4725-0.2759之間，均值為0.3938; Shannon信息指數(shù)(Ⅰ)在0.6649-0.4340之間，均值為0.5743。
　　 3.3供試材料之間的遺傳相似系數(shù)在0.4590～0.7541之間，平均值為0.6287，說明材料間的親緣關系較近;其中‘Z4’和‘朱砂壘’親緣關系最遠，遺傳相似系數(shù)為0.4590，遺傳距離為0.7787;‘Z7’和‘Z9’親緣關系最近，

7、遺傳相似系數(shù)為0.7541，遺傳距離為0.2822。
　　 3.432份雜交一代的平均Nei's遺傳多樣性指數(shù)H=0.3941、平均Shannon信息指數(shù)I=0.5740，對照品種的上述兩個指數(shù)分別為H=0.3114、I=0.4598，顯然雜交一代的這兩項指標均高于對照品種，表明雜交一代的遺傳多樣性更豐富、遺傳背景更復雜。
　　 3.5根據SRAP擴增結果，利用UPGMA法構建樹狀聚類圖，聚類分析將32份雜交一代分為4類