共振光散射法研究金屬離子-核固紅-蛋白質(zhì)體系的相互作用及其分析應(yīng)用.pdf

1、蛋白質(zhì)的定量測(cè)定是生物化學(xué)、生物技術(shù)和臨床醫(yī)學(xué)中經(jīng)常涉及的內(nèi)容。它已經(jīng)成為蛋白質(zhì)研究的一項(xiàng)重要內(nèi)容，具有重要的意義。因此，建立新的定量測(cè)定蛋白質(zhì)的方法在很多領(lǐng)域都是非常重要的，如生命科學(xué)，臨床診斷和定量檢測(cè)。共振光散射技術(shù)因?yàn)殪`敏度高、穩(wěn)定性好、方法簡(jiǎn)單、試劑廉價(jià)、易操作等優(yōu)點(diǎn)已經(jīng)被廣泛用于蛋白質(zhì)、核酸和藥物等組分的測(cè)定。本文采用共振光散射法并結(jié)合熒光光譜法和紫外吸收光譜法分別研究了金屬離子Cu2+、Ca2+和A13+與核固紅、蛋白質(zhì)的

2、相互作用。根據(jù)共振瑞利散射信號(hào)強(qiáng)度的變化值與蛋白質(zhì)的濃度成正比，建立了測(cè)定納克級(jí)蛋白質(zhì)的新方法。
　　 在pH為3.7時(shí)，核固紅與Cu2+能夠形成2∶1的螯合物。該螯合物在蛋白質(zhì)表面通過(guò)靜電作用力和疏水作用力聚集形成聚合物。該現(xiàn)象不僅導(dǎo)致吸收光譜、熒光光譜發(fā)生變化，而且導(dǎo)致共振瑞利散射明顯增強(qiáng)。在430nm處，人血清白蛋白(HSA)和牛血清白蛋白(BSA)分別在0.10～8.0μg/mL和0.19～11.4μg/mL的濃度范圍內(nèi)

3、與增強(qiáng)的共振瑞利散射程度成良好的線性關(guān)系，對(duì)應(yīng)的檢測(cè)限分別是0.076μg/mL和0.105μg/mL。在598nm處，HAS和BSA分別在0.05～3.0μg/mL和0.096～4.78μg/mL的濃度范圍內(nèi)與增強(qiáng)的共振瑞利散射程度成良好的線性關(guān)系，對(duì)應(yīng)的檢測(cè)限分別是26ng/mL和33ng/mL。并對(duì)人血清樣品進(jìn)行了分析。
　　 在pH4.0的溶液中，核固紅與Ca2+能夠形成螯合物。采用熒光分析法測(cè)得螯合物組成為Ca(Ⅱ):

4、核固紅=1∶2。該螯合物通過(guò)靜電作用力和疏水作用力在蛋白質(zhì)表面聚集，導(dǎo)致體系的吸收光譜、熒光光譜和共振瑞利散射光譜變化。在最佳實(shí)驗(yàn)條件下和430nm處，HSA和BSA分別在0.3～7.0μg/mL和0.1～9.0μg/mL的濃度范圍內(nèi)與增強(qiáng)的共振瑞利散射程度成良好的線性關(guān)系，對(duì)應(yīng)的檢測(cè)限分別是23ng/mL和12ng/mL。此外，在592nm處，HSA和BSA分別在0.05～2.0μg/mL和0.04～2.0μg/mL的濃度范圍內(nèi)與增強(qiáng)

5、的共振瑞利散射程度成良好的線性關(guān)系，對(duì)應(yīng)韻檢測(cè)限分別是6.0ng/mL和5.0ng/mL。方法用于分析人血清、尿樣及唾液樣品。
　　 在pH4.0的溶液中，核固紅和A13+能夠形成1∶1的螯合物。該螯合物通過(guò)靜電作用力和疏水作用力與蛋白質(zhì)發(fā)生相互作用形成聚集體。這種作用導(dǎo)致吸收光譜、熒光光譜變化和共振瑞利散射強(qiáng)度的增強(qiáng)。在440nm處，HSA和BSA分別在0.20～12.0μg/mL和0.60～26.0μg/mL的濃度范圍內(nèi)與增