共振光散射法在蛋白質(zhì)和藥物分析中的應(yīng)用.pdf

1、共振光散射技術(shù)(resonancelightscattering，RLS)是一項(xiàng)借助普通熒光分光光度計(jì)靈敏檢測(cè)聚集體光散射信號(hào)的分析技術(shù)。自1993年P(guān)asternack等人首次提出將RLS技術(shù)用于生物大分子組裝化學(xué)以來(lái)，該技術(shù)因其簡(jiǎn)便、快速，靈敏度高、無(wú)需使用復(fù)雜儀器等優(yōu)點(diǎn)而倍受關(guān)注。作為一種新的分子光譜技術(shù)，RLS技術(shù)已被廣泛地用于生物大分子和藥物等的分析研究領(lǐng)域，成為分析化學(xué)領(lǐng)域強(qiáng)有力的分析技術(shù)。這些研究發(fā)現(xiàn)，與生物大分子測(cè)定常采

2、用的分光光度法和熒光光度法相比，RLS技術(shù)除了能獲得更高靈敏度的優(yōu)點(diǎn)外，還具有更廣泛探針?lè)秶膬?yōu)勢(shì)，與藥物分析常見的分光光度法和高效液相色譜法相比，RLS技術(shù)表現(xiàn)出更簡(jiǎn)便、更靈敏的特征。 基于RLS技術(shù)，本文分別以與蛋白質(zhì)作用的噸鎓類染料吡咯紅Y和陰離子單偶氮染料波爾多紅、及與藥物作用的曙紅B為例，成功地將RLS技術(shù)應(yīng)用于生物大分子蛋白質(zhì)和藥物定量測(cè)定中，從而進(jìn)一步證明了RLS技術(shù)在拓展光譜探針?lè)矫娴膬?yōu)勢(shì)。全文有六個(gè)章節(jié)組成。

3、 第一章：簡(jiǎn)述了RLS技術(shù)、RLS新技術(shù)及其分析應(yīng)用，綜述了2000年以來(lái)RLS技術(shù)在蛋白質(zhì)和藥物分析中的應(yīng)用，并對(duì)其發(fā)展作了總結(jié)和展望，引用文獻(xiàn)135篇。 第二章：在硫酸存在下，吡咯紅Y-SDS體系的RLS信號(hào)被蛋白質(zhì)強(qiáng)烈增強(qiáng)，其最大散射峰位于364nm。增強(qiáng)的RLS強(qiáng)度與蛋白質(zhì)的濃度在一定范圍內(nèi)成正比，由此建立了測(cè)定蛋白質(zhì)的新方法。測(cè)定牛血清白蛋白和人血清白蛋白的線性范圍分別為0.15～3.6μg/mL和0.06～4.

4、8μg/mL，檢測(cè)線分別為21.0ng/mL和12.0ng/mL。該方法成功地用于合成樣、人血清和尿樣中蛋白總含量的測(cè)定。 第三章：在pH3.92的酸性條件下，波爾多紅與蛋白質(zhì)作用導(dǎo)致體系的RLS增強(qiáng)，在波長(zhǎng)363nm處光散射強(qiáng)度最大，且RLS增強(qiáng)程度與蛋白質(zhì)的濃度在一定范圍內(nèi)呈線性關(guān)系。用于血清、尿樣和唾液中蛋白質(zhì)的測(cè)定，結(jié)果令人滿意。 第四章：在pH3.50Walpole緩沖溶液，鹽酸氯丙嗪與鹵代熒光素染料曙紅B共存

5、時(shí)，體系產(chǎn)生顯著增強(qiáng)的RLS信號(hào)，其最大散射峰位于364nm處。該方法測(cè)定鹽酸氯丙嗪的線性范圍為0.05～3.0μg/mL，檢測(cè)限為19.8ng/mL，并成功地應(yīng)用于鹽酸氯丙嗪片劑、針劑和人血清及尿樣中鹽酸氯丙嗪的測(cè)定。 第五章：在pH3.50，微量的鹽酸異丙嗪對(duì)曙紅B溶液有RLS增強(qiáng)作用。在最大散射波長(zhǎng)363nm處測(cè)定，體系的RLS增強(qiáng)強(qiáng)度與鹽酸異丙嗪的濃度在0.075～4.5μg/mL范圍內(nèi)呈線性關(guān)系，據(jù)此建立了一種測(cè)定鹽酸