膽酸(CA)、石膽酸(LCA)和鵝脫氧膽酸(CDCA)對體外細(xì)粒棘球蚴原頭節(jié)生長的影響.pdf

1、目的：
　　本研究以體外培養(yǎng)的細(xì)粒棘球蚴原頭節(jié)為研究對象，將不同濃度的膽酸、石膽酸和鵝脫氧膽酸體外作用于細(xì)粒棘球蚴原頭節(jié)，探討膽酸、石膽酸和鵝脫氧膽酸體外對細(xì)粒棘球蚴原頭節(jié)的作用。
　　方法：
　　從自然感染細(xì)粒棘球蚴病的綿羊肝臟內(nèi)無菌獲得細(xì)粒棘球蚴原頭節(jié)，將其加入RPMI1640培養(yǎng)基中體外培養(yǎng)，5d后，將原頭節(jié)分別加入不同濃度膽酸、石膽酸和鵝脫氧膽酸（500、1000、2000和3000μmol/L）中體外孵育。每

2、組加入約2000個細(xì)粒棘球蚴原頭節(jié)。不同濃度膽酸、石膽酸和鵝脫氧膽酸作用細(xì)粒棘球蚴原頭節(jié)不同時間，用0.1％伊紅染色的方法，在倒置顯微鏡光鏡下觀察原頭節(jié)的活力及形態(tài)，并繪制原頭節(jié)活力曲線；電子顯微鏡下觀察原頭節(jié)超微結(jié)構(gòu)改變；用Western blot檢測原頭節(jié)GRP78蛋白表達(dá)水平；用Caspase-3活性檢測試劑盒檢測原頭節(jié)內(nèi)caspase-3酶活性。
　　結(jié)果：
　　在整個實驗過程中，DMSO對照組細(xì)粒棘球蚴原頭節(jié)的活力

3、幾乎沒有改變，而將不同濃度膽酸、石膽酸和鵝脫氧膽酸作用于細(xì)粒棘球蚴原頭節(jié)，膽酸（CA）作用6d后，500μmol/L、1000μmol/L、2000μmol/L、3000μmol/L組細(xì)粒棘球蚴原頭節(jié)的活力分別為94.12%、90.56%、81.43%、59.15%；連續(xù)觀察，在用藥第12d，500μmol/L、1000μmo l/L、2000μmol/L、3000μmol/L組細(xì)粒棘球蚴原頭節(jié)的活力分別為85.86%、74.53%、5

4、6.84%、26.45%，3000μmol/L CA組殺傷作用最為明顯，作用第18d后，細(xì)粒棘球蚴原頭節(jié)的死亡率100%。石膽酸（LCA）作用1d后，500μmol/L、1000μmol/L、2000μmol/L、3000μmol/L組細(xì)粒棘球蚴原頭節(jié)的活力分別為93.63%、87.59%、75.00%、42.70%；連續(xù)觀察，在用藥第3d，500μmol/L、1000μmo l/L、2000μmol/L、3000μmol/L組細(xì)粒棘球

5、蚴原頭節(jié)的活力分別為59.26%、43.97%、32.56%、7.45%，3000μmol/L LCA組殺傷作用最為明顯，作用第5d后，細(xì)粒棘球蚴原頭節(jié)的死亡率為100%。鵝脫氧膽酸（CDCA）作用3d后，500μmol/L、1000μmol/L、2000μmo l/L、3000μmol/L組細(xì)粒棘球蚴原頭節(jié)的活力分別為95.97%、87.95%、83.17%、23.70%；連續(xù)觀察，在用藥第5d，500μmol/L、1000μmo l

6、/L、2000μmol/L、3000μmol/L組細(xì)粒棘球蚴原頭節(jié)的活力分別為95.23%、81.48%、49.04%、1.54%，3000μmol/L CDCA組殺傷作用最為明顯，作用第6d后，細(xì)粒棘球蚴原頭節(jié)的死亡率為100%。掃描電鏡下觀察發(fā)現(xiàn)膽酸、石膽酸和鵝脫氧膽酸作用后，原頭節(jié)體表出現(xiàn)指狀突起、頂端體表出現(xiàn)皺縮，隨著作用時間和濃度的增加，漸出現(xiàn)頂突界面缺損，吸盤變形，蟲體表面出現(xiàn)凹陷，指狀突起增多，甚至出現(xiàn)蟲蝕樣損害。透射電子

7、顯微鏡下觀察發(fā)現(xiàn)原頭節(jié)體被合胞體帶變薄，結(jié)構(gòu)松散，囊泡擴(kuò)張，微毛減少，甚至消失；部分實質(zhì)細(xì)胞基質(zhì)濃縮，細(xì)胞核核周隙增寬，核仁消失，核異染色質(zhì)凝集，邊緣化。Western bolt檢測顯示，膽酸、石膽酸和鵝脫氧膽酸可降低細(xì)粒棘球蚴原頭節(jié)GRP78蛋白表達(dá)水平。Caspase-3活性檢測發(fā)現(xiàn)，較正常對照組，膽酸、石膽酸和鵝脫氧膽酸可增加原頭節(jié)的caspase-3酶活性。由此證實隨著度膽酸、石膽酸和鵝脫氧膽酸作用時間的延長和濃度的增加，膽酸、