BPI蛋白在小鼠睪丸與附睪的表達(dá)特性及功能的初步研究.pdf

1、殺菌滲透性增強(qiáng)蛋白(BPI)是一種機(jī)體內(nèi)源性的具有強(qiáng)大抗菌活性的陽離子抗菌蛋白,在機(jī)體先天防御感染方面具有重要作用。最初是從人中性粒細(xì)胞的嗜苯胺藍(lán)顆粒中分離得到,也分布于嗜酸性粒細(xì)胞的特殊顆粒內(nèi)及多形核白細(xì)胞的表面。它通過與細(xì)菌胞壁上脂多糖的高度親和以及中和內(nèi)毒素的途徑來抑制或者殺死革蘭陰性菌。有研究指出,在正常情況下,小鼠睪丸與附睪即有高水平的BPI表達(dá),提示它可能與精子發(fā)生及成熟具有一定的關(guān)系。研究表明,睪丸中階段特異性表達(dá)和附睪中

2、區(qū)域特異性表達(dá)的基因與精子發(fā)生、精子成熟過程密切相關(guān)。本實(shí)驗(yàn)旨在進(jìn)一步觀察BPI蛋白基因在睪丸與附睪的表達(dá)特性,尤其是它在生后發(fā)育中睪丸表達(dá)的時(shí)空規(guī)律以及它在附睪表達(dá)的區(qū)域特異性,為進(jìn)一步探討其在生殖活動(dòng)中的可能作用提供線索。
　　本研究首先經(jīng)RT-PCR顯示,BPImRNA在小鼠睪丸與附睪高表達(dá),且只表達(dá)于附睪頭部。在前列腺、精囊腺和凝固腺未見表達(dá)。在生后發(fā)育過程中,BPI mRNA的表達(dá)水平隨著增齡而升高,至性成熟期(60d)

3、時(shí)達(dá)到峰值,提示BPI mRNA的表達(dá)可能呈雄激素依賴方式。
　　我們經(jīng)原核重組表達(dá)、親和層析純化了BPI-N端蛋白,并獲得抗BPI-N兔多克隆抗體。以其為一抗經(jīng)蛋白免疫熒光染色后發(fā)現(xiàn),BPI蛋白局限表達(dá)于附睪頭近體部上皮細(xì)胞并可附著在精子頭部項(xiàng)體區(qū)質(zhì)膜上;并且BPI也可位于頂體內(nèi),在誘發(fā)項(xiàng)體反應(yīng)后得以暴露;還有一部分發(fā)生了頂體反應(yīng)的精子可能因BPI蛋白被釋放或者被降解而無陽性熒光。這些發(fā)現(xiàn)提示,分布于精子的BPI蛋白可能會(huì)因其所