PRMT6在小鼠睪丸中的表達(dá)特征及功能研究.pdf

1、目的：探討蛋白精氨酸甲基轉(zhuǎn)移酶6（protein arginine methyltransferase6，PRMT6）在小鼠睪丸組織中的表達(dá)特征，研究 PRMT6是否受到雄激素及雄激素受體（androgen receptor，AR）的調(diào)控，以及研究PRMT6的相關(guān)功能。
　　方法：運(yùn)用反轉(zhuǎn)錄PCR、實(shí)時(shí)熒光定量PCR及蛋白質(zhì)免疫印跡技術(shù)，研究Prmt6在小鼠睪丸中的表達(dá)特征；通過(guò)睪丸組織免疫熒光染色技術(shù)和在細(xì)胞中轉(zhuǎn)入pEGFP-C

2、1-PRMT6融合質(zhì)粒探討PRMT6的亞細(xì)胞定位；運(yùn)用雙熒光素酶實(shí)驗(yàn)分析Prmt6的啟動(dòng)子活性是否受到AR的調(diào)控；在TM4細(xì)胞內(nèi)轉(zhuǎn)入Ar的干擾RNA siAr或Ar的過(guò)表達(dá)質(zhì)粒pcDNA3.1-Ar，以觀察AR是否調(diào)控Prmt6的表達(dá)；將Prmt6的干擾質(zhì)粒 shRNA轉(zhuǎn)入生殖細(xì)胞系中，并用細(xì)胞劃痕實(shí)驗(yàn)及流式細(xì)胞技術(shù)探討Prmt6對(duì)生殖細(xì)胞遷移和凋亡的影響。
　　結(jié)果：PCR與蛋白印跡結(jié)果顯示，與野生型（wild type，WT）

3、小鼠相比，PRMT6在AR敲除（androgen receptor knockout，ARKO）小鼠中的表達(dá)水平升高，且在1-8周WT小鼠睪丸中的表達(dá)隨年齡增長(zhǎng)有下降趨勢(shì)；睪丸組織免疫熒光結(jié)果顯示在1-8周小鼠睪丸內(nèi) PRMT6主要定位于精原、精母細(xì)胞的細(xì)胞核內(nèi)， EGFP-PRMT6綠色熒光蛋白同樣也定位于TM4和COS7細(xì)胞的細(xì)胞核內(nèi)；通過(guò)熒光素酶實(shí)驗(yàn)，我們發(fā)現(xiàn)在雄激素及AR處理的細(xì)胞中，Prmt6的轉(zhuǎn)錄受到抑制；當(dāng)在TM4細(xì)胞中轉(zhuǎn)