載VEGF高分子緩釋微粒促進(jìn)心肌梗死兔血管新生的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、第一部分載VEGF高分子緩釋微粒的制備及其特性檢測(cè)
　　 目的：
　　 1.制備包裹血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子(vascular endothelial growth factor，VEGF)的乳酸/羥基乙酸共聚物(poly(lactic-co-glycolic acid)，PLGA)高分子緩釋微粒。
　　 2.檢測(cè)該高分子緩釋微粒的基本物理特性及體外釋藥特性，觀察其在體內(nèi)外超聲顯影效果。
　　 方法：
　　

2、 1.應(yīng)用雙乳劑揮發(fā)法和冷凍干燥技術(shù)，將可體內(nèi)生物降解的高分子聚合物乳酸/羥基乙酸共聚物(PLGA)對(duì)VEGF進(jìn)行包裹，制備包裹VEGF的PLGA高分子緩釋微粒。
　　 2.采用倒置光學(xué)顯微鏡及掃描電鏡對(duì)VEGF-PLGA高分子緩釋微粒進(jìn)行形態(tài)學(xué)觀察并分析粒徑大??；ELISA酶聯(lián)免疫吸附法檢測(cè)該高分子緩釋微粒的載藥量、包封率及其體外釋藥特性；應(yīng)用彩色多普勒超聲診斷儀觀察其在體內(nèi)外超聲顯影。
　　 結(jié)果：
　　

3、1.成功制備了VEGF-PLGA高分子緩釋微粒，得到穩(wěn)定且較高的包封率及載藥量。
　　 2.所制備的VEGF-PLGA緩釋微粒光鏡下形態(tài)規(guī)則，呈球形，大小均勻，分散度好；電鏡下形態(tài)圓整，表面光滑；制得微粒平均粒徑2.0μm；平均包封率82.7％，平均載藥量5.97％；緩釋微粒在最初6h體外釋藥約10％，30天藥物緩釋約75％；高分子微粒在高機(jī)械指數(shù)二次諧波超聲下體內(nèi)外均可顯影。
　　 結(jié)論：
　　 應(yīng)用雙乳劑揮發(fā)

4、法和冷凍干燥技術(shù)制備包裹VEGF高分子緩釋微粒，包封率及載藥量高，長(zhǎng)效緩釋作用明顯，無(wú)毒性，符合理想藥物載體的基本要求，為治療性血管新生及建立微循環(huán)血管床提供了一種新型的藥物劑型。同時(shí)，其在超聲下具有一定的顯影效果。
　　 第二部分載血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子PLGA高分子緩釋微粒治療兔急性心肌梗死
　　 目的：
　　 觀察載血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子PLGA高分子緩釋微粒對(duì)新西蘭大白兔急性心肌梗死后血管新生及微循環(huán)血管床重建的治療

5、作用。
　　 方法：
　　 取30只新西蘭大白兔建立急性心肌梗死模型，將制備成功的心肌梗死模型兔隨機(jī)分為4組進(jìn)行處理，即①VEGF-PLGA組，②VEGF組，③PLGA組，④空白對(duì)照組。建模成功后第5天，經(jīng)心肌注射藥物。①組注射VEGF-PLGA懸液，②組注射VEGF蛋白溶液，③組注射PLGA懸液，④組注射等量生理鹽水。
　　 于治療前及治療后4周，分別應(yīng)用超聲心動(dòng)圖測(cè)量左室舒張末期內(nèi)徑及收縮末期內(nèi)徑，評(píng)價(jià)左室功

6、能。
　　 治療后4周處死心梗模型兔取材，采用免疫組化法檢測(cè)心肌組織CD34的表達(dá)，并在顯微鏡下計(jì)數(shù)心肌內(nèi)新生微血管密度(microvessel density，MVD)，免疫組化法檢測(cè)血管生成素1(angiopoietin-1，Ang-1)的表達(dá)。采用ELISA及Western blot法檢測(cè)心肌組織內(nèi)VEGF蛋白表達(dá)情況。
　　 結(jié)果：超聲心動(dòng)圖顯示治療后①組左心室收縮末期內(nèi)徑低于其余各組(P<0.01)，射血分?jǐn)?shù)高

7、于其余各組(P<0.01)。免疫組化結(jié)果顯示①組心肌組織中有大量CD34表達(dá)，新生血管最多，MVD計(jì)數(shù)為43.50±2.89個(gè)/高倍鏡視野，明顯高于其余各組(P<0.05)；①組心肌組織中大量Ang-1表達(dá)，明顯高于其余各組。ELISA檢測(cè)結(jié)果顯示①組心肌組織中VEGF蛋白表達(dá)量為122.92±2.59ng/g，明顯高于其余各組(P<0.05)。Western blot結(jié)果顯示①組可見(jiàn)一大小約45KD的蛋白質(zhì)條帶，其余各組可見(jiàn)同樣大小弱