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1、目的:1.為梗死心肌血管新生的實驗研究提供方法和移植的細胞;2.觀察兔自體外周血EPC移植療法對梗死心肌的成血管作用。 方法:利用密度梯度離心法分離外周血單個核細胞,在內(nèi)皮環(huán)境下培養(yǎng)并鑒定。CD31/vWF雙陽性細胞被認為是所需要的內(nèi)皮祖細胞(EPC)。MTT實驗觀察貼壁細胞的增殖活性。采用冠狀動脈左前降支(LAD)結(jié)扎造成家兔急性心肌梗死模型,按1mg.kg-1.d-1給予EPC動員劑辛伐他汀23d。術(shù)后48h通過耳緣靜脈穿刺采血2
2、0ml,分離單個核細胞,在內(nèi)皮環(huán)境下培養(yǎng)7d,貼壁細胞用于靜脈回輸(EPC移植組,用5-溴-2-脫氧尿嘧啶核苷即BrdU標(biāo)記,1×106個貼壁細胞/kg體重,n=8)或鑒定,辛伐他汀組(n=7)僅輸入等量M199培養(yǎng)基,移植后14d觀察梗死區(qū)周圍毛細血管密度。辛伐他汀對EPC的動員效果用流式細胞儀分析。 結(jié)論:1.利用外周血能夠培養(yǎng)出供移植使用的EPC,但數(shù)量上尚嫌不足;2.培養(yǎng)的EPC通過靜脈注射移植,能夠增加缺血心肌局部的毛細血管
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