功能性生物蛋白分子納米化制劑的研究.pdf

1、目的：
　　研究功能性生物蛋白分子在藥物傳遞系統(tǒng)領(lǐng)域的應(yīng)用：1）以胰島素為治療藥物的代表，研究口服胰島素納米粒的制備、穿膜肽（小分子量魚精蛋白）與胰島素共價(jià)偶聯(lián)物的合成及二者對(duì)糖尿病大鼠血糖的調(diào)節(jié)作用；2）以牛血清白蛋白（BSA）為載體材料的代表，研究BSA載舒尼替尼和姜黃素納米粒的制備工藝，利用聯(lián)合給藥和納米制劑技術(shù)進(jìn)行藥物抑制MCF-7腫瘤增殖能力及其機(jī)制的研究。
　　方法：
　　1.胰島素作為治療藥物的口服納米粒

2、：1）制備胰島素-聚乙二醇-小分子量魚精蛋白（胰島素-PEG-LMWP）復(fù)合物，以殼聚糖季銨鹽（TMC）包被的聚乳酸-羥基共聚物（PLGA）為載體聚合物材料，按乙酸乙酯-聚乙烯醇（EA-PVA）復(fù)乳法制備載胰島素或胰島素-PEG-LMWP復(fù)合物納米粒，測(cè)定粒徑、ζ-電位和包封率，并對(duì)納米粒的模擬胃腸液釋藥行為進(jìn)行考察。2）建立大鼠糖尿病模型，將載胰島素或胰島素-PEG-LMWP復(fù)合物納米粒進(jìn)行口服給藥，監(jiān)測(cè)給藥后大鼠的血糖水平變化情況，

3、考察口服納米粒胰島素-PEG-LMWP復(fù)合物對(duì)降血糖效果的促進(jìn)作用。
　　2. BSA作為載體材料的納米粒：1）對(duì)BSA納米制劑制備條件進(jìn)行優(yōu)化，考察BSA濃度、藥物濃度、體系pH和反應(yīng)時(shí)間對(duì)納米制劑的影響，選擇最佳的納米粒制備方案。透射電鏡觀察納米制劑形態(tài)和大小，并進(jìn)行納米制劑的穩(wěn)定性和體外釋藥考察。2）進(jìn)行MTT細(xì)胞毒實(shí)驗(yàn)，研究聯(lián)合給藥和BSA載藥納米制劑對(duì)腫瘤細(xì)胞的增殖抑制作用。采用激光共聚焦顯微鏡和流式細(xì)胞儀考察腫瘤細(xì)胞對(duì)

4、藥物的攝取率，并用流式細(xì)胞儀初步探究藥物抑制腫瘤細(xì)胞增殖的機(jī)制。3）建立乳腺癌動(dòng)物模型并給藥，監(jiān)測(cè)動(dòng)物體重和腫瘤體積的變化，考察舒尼替尼/姜黃素聯(lián)合給藥和BSA載藥納米制劑在體內(nèi)的抗腫瘤活性。
　　結(jié)果：
　　1.胰島素作為治療藥物的口服納米粒：1）獲得了粒徑為246.9±4.7 nm，水中ζ-電位為-42.2±4.3 mV，包封率達(dá)45.4±2.3％的口服胰島素或胰島素-PEG-LMWP復(fù)合物納米粒。納米粒含酶模擬胃腸液中

5、的釋藥行為表現(xiàn)為先快后慢兩相釋放特征。2）載胰島素-PEG-LMWP復(fù)合物的納米粒口服給予糖尿病大鼠后，2 h后可使血糖降低為給藥前初始值的70%左右，給藥后12 h仍可維持血糖水平為給藥前的50%左右，相對(duì)于胰島素皮下注射的藥理學(xué)生物利用度為17.98±5.62%，顯著高于載胰島素納米粒的藥理學(xué)生物利用度（11.24±3.92%）。
　　2.BSA作為載體材料的納米粒：1）當(dāng)BSA濃度為20 mg/mL、舒尼替尼和姜黃素濃度分別

6、為125μg/mL和250μg/mL、體系pH為7且反應(yīng)時(shí)間為4 h時(shí)，可獲得BSA納米制劑最佳制備方案，粒徑為103 nm左右，對(duì)舒尼替尼和姜黃素的的包封率超過90%。在透射電鏡下，BSA納米粒表現(xiàn)為粒徑80-200 nm的近圓形顆粒。體外穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn)表明BSA納米制劑穩(wěn)定性良好，同時(shí)BSA納米制劑的體外釋藥行為與藥物 PBS溶液相當(dāng)。2）MTT細(xì)胞毒實(shí)驗(yàn)表明，聯(lián)合給藥與單獨(dú)舒尼替尼或姜黃素給藥相比可以更好的抑制腫瘤細(xì)胞的增殖，BSA聯(lián)

7、合載藥納米制劑后將獲得更優(yōu)的抑制增殖能力。聯(lián)合給藥可以增加藥物的入胞量，BSA納米制劑不會(huì)對(duì)藥物入胞產(chǎn)生不良影響。舒尼替尼和姜黃素對(duì)促進(jìn)腫瘤細(xì)胞凋亡作用不明顯，但提示有阻斷腫瘤細(xì)胞周期的作用。3）體內(nèi)實(shí)驗(yàn)表明，聯(lián)合給藥與單獨(dú)舒尼替尼或姜黃素給藥相比具有更好的抗腫瘤增殖能力，使腫瘤體積明顯減小，但使動(dòng)物體重降低較多；BSA聯(lián)合載藥納米粒具有最佳的抗腫瘤效果并減小動(dòng)物體重的降低程度。
　　結(jié)論：
　　1.胰島素作為治療藥物的口服

8、納米粒：1）將胰島素或胰島素-PEG-LMWP復(fù)合物載入TMC包被的PLGA納米粒中，可使胰島素或胰島素復(fù)合物在模擬胃腸液中穩(wěn)定釋放并維持了較好的降血糖效果，對(duì)促進(jìn)糖尿病大鼠血糖水平的恢復(fù)具有積極作用。2）胰島素復(fù)合物納米粒比胰島素納米粒有更好的降血糖效果。
　　2. BSA作為載體材料的納米粒：1）舒尼替尼/姜黃素聯(lián)合給藥相比舒尼替尼或姜黃素單獨(dú)給藥在體外和體內(nèi)實(shí)驗(yàn)中均具有更好的抑制腫瘤細(xì)胞增殖的作用。2）BSA載藥納米制劑可通