2023年全國碩士研究生考試考研英語一試題真題(含答案詳解+作文范文)_第1頁
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文檔簡介

1、背景及目的:
  骨性關(guān)節(jié)炎(OA)在全世界范圍內(nèi)都被人們所熟知,主要累及膝關(guān)節(jié),是老人下肢致殘的主要危險因素。國內(nèi)外眾多學者多年來進行大量不懈的研究,但其確切的病因及發(fā)病機制仍不甚明了。OA治療主要針對三個方面:減輕疼痛、改善功能、延緩或阻止疾病進展,但現(xiàn)階段仍缺乏早期有效的治療,治療方法主要包括非藥物保守治療、非甾體類抗炎藥緩解疼痛、氨基糖苷類等營養(yǎng)軟骨藥以及關(guān)節(jié)潤滑劑透明質(zhì)酸鈉。但這些治療均不針對發(fā)病病理機制,不能很好的控制

2、疾病進展,最終患者不得不進行關(guān)節(jié)置換,不僅給患者造成負擔,也給國家衛(wèi)生健康系統(tǒng)造成巨大經(jīng)濟負擔。因此深入探究OA病理損傷機制,早期針對病因預(yù)防及治療至關(guān)重要。越來越多的研究表明OA中,滑膜是低級別的,滑膜炎不是造成軟骨缺損的主要原因。早在上世紀就有研究指出OA滑膜及軟骨中存在補體系統(tǒng)的激活,但是補體終末復(fù)合物MAC在滑膜及軟骨中是否都能最終形成,滑膜和軟骨誰起主要的病理角色仍不甚明了。本實驗通過建立大鼠骨性關(guān)節(jié)炎模型探討補體復(fù)合物MAC

3、是否在OA軟骨及滑膜中起一定的病理作用,是否是OA進展中的主要病理因素之一。
  方法:
  第一部分動物模型建立及標本檢測
  1)動物模型建立及病理評分:將30只SD大鼠隨機分為對照組、4周組、8周組、12周組。手術(shù)組每組10只,取大鼠后肢一側(cè)膝關(guān)節(jié)行前交叉韌帶切斷加部分內(nèi)側(cè)半月板切除術(shù)制造骨性關(guān)節(jié)炎模型;另一側(cè)僅切開皮膚暴露關(guān)節(jié)腔作為對照組。手術(shù)后4周,8周及12周取兩側(cè)膝關(guān)節(jié)軟骨行大體觀察、HE染色、番紅 O-

4、固綠染色、甲苯胺藍染色,估計軟骨退變程度以及進行組織病理學的Mankin評分,滑膜僅行HE染色后行病理評分。
  2)應(yīng)用免疫組化、Western Blot及Elisa技術(shù)檢測軟骨及滑膜中MAC沉積情況。
  第二部分體外軟骨細胞培養(yǎng)及補體攻擊實驗
  1)軟骨細胞原代培養(yǎng)及鑒定:原代培養(yǎng)大鼠軟骨細胞,應(yīng)用甲苯胺藍染色及Ⅱ型膠原免疫熒光鑒定軟骨細胞。
  2)補體攻擊實驗及免疫熒光檢測MAC形成:取不同濃度血清攻

5、擊軟骨細胞,并行免疫熒光檢測MAC在軟骨細胞表面沉積情況。
  結(jié)果:
  第一部分動物模型建立及標本檢測
  1)動物模型建立及病理評分:與對照組相比,手術(shù)組大鼠膝關(guān)節(jié)軟骨4周,8周及12周后呈現(xiàn)軟骨粗糙,糜爛,裂隙形成,缺損及骨贅形成等早中晚期OA表現(xiàn)。Mankin評分:對照組(0.11±0.17)分,4周組(3.89±1.31)分,8周組(8.17±1.67)分,12周組(12.89±1.05)分,各組間相比均有

6、統(tǒng)計學差異(p<0.01),損傷逐漸加重?;ぴu分:對照組:(0.00±0.00)分,1周組:(3.47±0.25)分,2周組:(4.58±0.51)分,4周組:(5.17±0.75)分,8周組:(4.17±0.75)分,12周組:(2.83±0.75)分,各組間有統(tǒng)計學意義(p<0.01),炎癥逐漸降低。
  2)免疫組化軟骨細胞細胞膜周圍出現(xiàn)環(huán)形MAC沉積,滑膜中沒有MAC。蛋白質(zhì)印跡發(fā)現(xiàn)實驗組有MAC條帶,對照組沒有。應(yīng)用E

7、lisa法檢測后,可見OA軟骨加入血清后隨著孵育時間延長,MAC量逐漸增加,而滑膜與PBS則趨勢相近。
  第二部分體外軟骨細胞培養(yǎng)及補體攻擊實驗
  1)軟骨細胞原代培養(yǎng)及鑒定:軟骨細胞生長良好,呈三角形、多邊形或長梭形。甲苯胺藍染色后可見軟骨細胞呈多邊形、三角形、長梭形或類圓形,軟骨細胞基質(zhì)被染成淺藍色,細胞核染成深藍。Ⅱ型膠原免疫熒光可見細胞質(zhì)染成紅色。細胞呈現(xiàn)多邊形或類圓形。
  2)補體攻擊實驗及免疫熒光檢測

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