佐劑性大鼠關(guān)節(jié)炎模型的寒熱證候研究.pdf

1、目的：通過觀察佐劑性關(guān)節(jié)炎大鼠的體重、足趾腫脹度、關(guān)節(jié)炎指數(shù)、滑膜病理及對(duì)細(xì)胞因子(IFN-γ、IL-4)的調(diào)控作用，來評(píng)價(jià)清熱除痹湯及烏頭合當(dāng)歸四逆湯兩種寒熱性質(zhì)不同的中藥湯劑對(duì)佐劑性關(guān)節(jié)炎大鼠的治療效果，并從以方測(cè)證的角度出發(fā)，探討佐劑性大鼠關(guān)節(jié)炎模型的寒熱證候偏向，為制作痹病動(dòng)物證候模型提供參考。 方法：將80只健康雄性Wistar大鼠按體重隨機(jī)分為正常組、模型組、清熱除痹湯大、中、小劑量組及烏頭合當(dāng)歸四逆湯大、中、小劑量

2、組。除正常組外，于其余各組大鼠右后足趾皮下注射加入滅活卡介苗的完全弗氏佐劑(卡介苗濃度為10mg/ml)0.1ml，誘導(dǎo)建立佐劑性關(guān)節(jié)炎模型。除正常組及模型組外，其余各組分別給予清熱除痹湯及烏頭合當(dāng)歸四逆湯大中小劑量灌胃。按照人體(臨床60kg/人)每天正常服藥劑量，日服等效劑量換算受試動(dòng)物的用藥劑量，大中小劑量分別定為人體常用劑量的15、10、5倍，各治療組共灌胃14天。觀察比較各組大鼠體重增長(zhǎng)、足趾腫脹度、關(guān)節(jié)炎指數(shù)、關(guān)節(jié)滑膜病理學(xué)

3、形態(tài)變化及血清細(xì)胞因子(IFN-γ、IL-4)水平的變化。 結(jié)果：1第10-12天起，模型組大鼠部分出現(xiàn)左后足關(guān)節(jié)皮膚發(fā)紅，輕度腫脹。20天左右，大鼠四肢關(guān)節(jié)紅腫加重，部分大鼠尾巴上出現(xiàn)明顯結(jié)節(jié)、耳部紅斑，大鼠活動(dòng)量減少，神萎懶動(dòng)，食欲下降，體重增加緩慢，毛發(fā)失去光澤。24天左右大鼠關(guān)節(jié)炎病變最為嚴(yán)重，活動(dòng)困難，體重增長(zhǎng)緩慢。正常組大鼠皮毛光澤色白，精神佳、活潑，飲食正常，狀態(tài)良好，毛發(fā)光澤，體重增加明顯，動(dòng)作自如，反應(yīng)靈敏。模

4、型組及烏頭合當(dāng)歸四逆湯大劑量組第28天體重與正常組相比，有極顯著差異(P<0.01)，清熱除痹湯大劑量及烏頭合當(dāng)歸四逆湯中劑量組第28天體重與正常組相比差異不顯著(P>0.05)。2病理切片HE染色可見：正常組關(guān)節(jié)滑膜由滑膜層、纖維層和滑膜皺襞組成，表面有1-2層滑膜細(xì)胞，由成纖維細(xì)胞樣細(xì)胞和巨噬細(xì)胞樣細(xì)胞組成，滑膜下組織未見水腫，血管無歹云血，無血管翳形成，無纖維組織增生，未見炎性細(xì)胞浸潤(rùn)。模型組關(guān)節(jié)滑膜明顯增厚，增生的滑膜組織可呈絨

5、毛狀，滑膜細(xì)胞增生、排列紊亂、層次增至3-7層，滑膜細(xì)胞數(shù)目增多、體積增大、水腫，滑膜下組織可見大量多形核白細(xì)胞、巨噬細(xì)胞、淋巴細(xì)胞等炎性細(xì)胞浸潤(rùn)，毛細(xì)血管及周圍的纖維組織增生，形成血管翳，偶見淋巴濾泡形成。各用藥組關(guān)節(jié)滑膜明顯增厚，滑膜細(xì)胞增生、排列紊亂、層次增至2-5層，滑膜細(xì)胞數(shù)目增多、體積增大、輕度水腫，滑膜下組織可見多形核自細(xì)胞、巨噬細(xì)胞、淋巴細(xì)胞等炎細(xì)胞浸潤(rùn)，偶見毛細(xì)血管及周圍的纖維組織增生，無淋巴濾泡和血管翳形成。3實(shí)驗(yàn)第

6、10-12天起，各造模組大鼠相繼出現(xiàn)左后足爪腫脹，各藥物治療組均有不同程度的抑制大鼠左后足腫脹度的作用。實(shí)驗(yàn)第28天，清熱除痹湯大、中劑量組及烏頭合當(dāng)歸四逆湯大、中劑量組與模型組大鼠左后足腫脹程度相比差異顯著(P<0.05)。4造模組大鼠關(guān)節(jié)炎指數(shù)(AI)均逐漸升高，各藥物治療組均有不同程度的抑制模型鼠AI升高的作用。實(shí)驗(yàn)第28天，清熱除痹大、中劑量組與模型組相比差異極顯著(P<0.01)，烏頭合當(dāng)歸四逆湯大、中劑量組與模型組相比差異顯

7、著(P<0.05)。5清熱除痹湯大劑量治療組IFN-γ水平與空白組相比差異不顯著(P>0.05)，余各治療組IFN-γ水平均與空白組及模型組有顯著性差異(P<0.05)。模型組IL-4水平與空白組相比差異不顯著(P>0.05)，其余各組血清IL-4水平與空白組及模型組相比均有顯著性差異(P<0.05)。 結(jié)論：1本實(shí)驗(yàn)研究成功復(fù)制了佐劑性關(guān)節(jié)炎(AA)模型，模型組大鼠體重增長(zhǎng)緩慢，繼發(fā)性關(guān)節(jié)紅腫明顯，關(guān)節(jié)炎指數(shù)明顯高于空白組，膝

8、關(guān)節(jié)滑膜病理顯示，滑膜增生水腫明顯。2各用藥治療組與模型組相比，體重、關(guān)節(jié)腫脹度、關(guān)節(jié)炎指數(shù)、及滑膜病理均較模型組有所改善，以清熱除痹湯大劑量組及烏頭合當(dāng)歸四逆湯中劑量治療組療效較為明顯。3清熱除痹湯及烏頭合當(dāng)歸四逆湯均能升高AA大鼠的IL-4水平，顯著降低AA大鼠血清異常增高的IFN-γ水平，其中清熱除痹湯大劑量治療組降IFN吖能力優(yōu)于其余治療組，提示清熱除痹湯能更有效調(diào)節(jié)促炎／抗炎的細(xì)胞因子平衡，改善機(jī)體自身免疫異常狀態(tài)，從而減輕從