肺炎衣原體的分離、傳代及應(yīng)用.pdf

1、第一部分:PBMC中肺炎衣原體的分離、培養(yǎng)及傳代
　　 目的:從外周血單個核細(xì)胞中分離肺炎衣原體，進(jìn)行培養(yǎng)、傳代、擴(kuò)增。方法:分離PBMC，用37PEG使肺炎衣原體陽性的PBMC裂解釋放出肺炎衣原體，然后與Hep-2細(xì)胞一起離心，繼續(xù)培養(yǎng)Hep-2細(xì)胞。再將Hep一細(xì)胞凍融破碎后，放入到新的Hep-2細(xì)胞培養(yǎng)瓶中進(jìn)行離心，以完成肺炎衣原體的一次傳代，然后以同樣的方法進(jìn)行二次傳代。用MIF及PCR法檢測Hep-2細(xì)胞中的肺炎衣原體

2、抗原。結(jié)果:MIF法檢測肺炎衣原體感染后的Hep一細(xì)胞，其胞內(nèi)肺炎衣原體抗原陽性;MIF法檢測一次傳代及二次傳代的Hep-2細(xì)胞，其胞內(nèi)肺炎衣原體抗原均陽性;PCR法檢測肺炎衣原體DNA陽性。結(jié)論:該方法可以實現(xiàn)PBMC中肺炎衣原體的分離，并實現(xiàn)進(jìn)一步的培養(yǎng)及傳代。
　　 第二部分自制肺炎衣原體抗原的應(yīng)用評估
　　 目的:對自制Cpn-Ag檢測血清抗體進(jìn)行評估.方法:粗制Cpn-Ag,Dot-ELISA法觀察自制Cpn-

3、Ag與進(jìn)口單抗的結(jié)合反應(yīng).用自制Cpn-Ag和進(jìn)口Cpn-AR39-Ag通過微量免疫熒光法同時檢測血清標(biāo)本268例(Cpn-IgM, IgA, IgG)。結(jié)果:Dot-ELISA法結(jié)果顯示自制Cpn-Ag能與進(jìn)口單抗發(fā)生結(jié)合反應(yīng)。自制Cpn-Ag與進(jìn)口Cpn-AR39-Ag檢測血清中Cpn-IgA, IgG, IgM抗體滴度(見表2, 4, 6)，兩抗原檢測一致率均達(dá)90％以上，以進(jìn)口AR39-Ag檢測為標(biāo)準(zhǔn)，自制抗原檢測靈敏度、特異度

4、均在90％以上。陽性似然比均大于10，在工gM陽性似然比高達(dá)30，陰性似然比均小于0. 1。采用配對卡方檢驗，顯示P值均>0. 05，表明自制與進(jìn)口Cpn-Ag檢測血清IgA,IgG,IgM結(jié)果沒有差別。同時采用一致性檢驗，Kappa值>>0. 75，認(rèn)為兩者具有高度一致性。兩抗原檢測陽性結(jié)果抗體滴度總體水平無差異。結(jié)論:自制Cpn-Ag檢測血清Cpn-IgA, IgG, IgM具有較高的靈敏度和特異度，與進(jìn)口AR-39-Ag檢測具有高