硫化氫通過上調(diào)SIRT1拮抗同型半胱氨酸誘導(dǎo)HT22細(xì)胞衰老.pdf

1、目的：探討硫化氫（Hydrogen sulfide,H2S）是否可以通過上調(diào)SIRT1拮抗同型半胱氨酸誘導(dǎo)HT22細(xì)胞衰老。
　　方法：Cell counting Kit-8(CCK8)法檢測細(xì)胞的活性；β-半乳糖苷酶染色法(Senescence Associated acidic-β-Galactosidase SA-β-Gal)、臺(tái)盼藍(lán)計(jì)數(shù)求細(xì)胞生長曲線及Western Blotting檢測細(xì)胞衰老相關(guān)蛋白P16INK4a、P

2、21CIPL蛋白的表達(dá)評(píng)價(jià)HT22細(xì)胞衰老；Western Blotting檢測沉默信息調(diào)節(jié)因子1(Silent mating type information regulation homolog1,SIRT1)蛋白的表達(dá)；羅丹明123(Rh123)染色熒光顯微鏡照相檢測細(xì)胞線粒體膜電位；Annexin V/PI染色流式細(xì)胞儀和Hoechst33258染色檢測細(xì)胞凋亡。
　　結(jié)果：1.Hcy(2.5、5、10 mmol/L)處理

3、HT22細(xì)胞48h后，SA-β-Gal陽性細(xì)胞明顯增加，衰老負(fù)性調(diào)控蛋白 P16INK4a、P21CIPL蛋白表達(dá)明顯上調(diào)，細(xì)胞生長曲線明顯呈下降趨勢，表明 Hcy能誘導(dǎo)HT22細(xì)胞衰老。2. NaHS(H2S供體，100、200、400μmol/L)可呈濃度依賴性地抑制Hcy(5mmol/L,48 h)誘導(dǎo)HT22細(xì)胞SA-β-Gal染色陽性細(xì)胞增加，P16INK4a、P21CIPL蛋白表達(dá)上調(diào)及細(xì)胞生長曲線下降趨勢，表明H2S可拮抗

4、Hcy誘導(dǎo)HT22細(xì)胞衰老。3. Hcy(2.5、5、10 mmol/L)處理 HT22細(xì)胞48小時(shí)后，細(xì)胞 SIRT1蛋白的表達(dá)呈濃度依賴性下調(diào)，表明 Hcy可抑制HT22細(xì)胞 SIRT1蛋白的表達(dá)。4. NaHS (100、200、400μmol/L,48h)可濃度依賴性地上調(diào) HT22細(xì)胞 SIRT1蛋白的表達(dá)，而且可逆轉(zhuǎn)Hcy(5 mmol/L)處理HT22細(xì)胞后SIRT1蛋白表達(dá)的下調(diào)作用，表明 H2S可上調(diào) HT2

5、2細(xì)胞 SIRT1的表達(dá)。5. SIRT1抑制劑Sirtinol(15μmol/L)可逆轉(zhuǎn)NaHS(400μmol/L)對Hcy(5mmol/L,48 h)增加HT22細(xì)胞中SA-β-Gal染色陽性細(xì)胞比例、上調(diào)衰老相關(guān)關(guān)鍵蛋白P16INK4a、P21CIPL蛋白表達(dá)以及促進(jìn)細(xì)胞生長曲線下降趨勢的阻斷作用，表明SIRT1對H2S抑制Hcy誘導(dǎo)HT22細(xì)胞衰老具有介導(dǎo)作用。
　　結(jié)論:H2S通過上調(diào)SIRT1拮抗Hcy誘導(dǎo)HT22細(xì)