植酸酶基因突變表達(dá)及突變蛋白熱穩(wěn)定性的研究.pdf

1、　　植酸酶作為一種新型的酶制劑,由于能有效地幫助非反芻動(dòng)物消化谷物、油料作物中的植酸鹽,提高磷的利用率,減輕由于磷排放對(duì)環(huán)境尤其是水源的污染,另外能夠改善家畜對(duì)無機(jī)鹽、氨基酸等營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的吸收,促進(jìn)其生長(zhǎng),所以得到了廣泛的研究和應(yīng)用。
　　本文以研究植酸酶的熱穩(wěn)定性為主要目的,通過致突變PCR的方法,對(duì)來源于Aspergillus niger的植酸酶基因phyA進(jìn)行突變。以突變后的基因?yàn)榛A(chǔ),構(gòu)建了PTE21a(+)-phyA/BL

2、21(DE3)和PTE35b(+)-phyA/BL21(DE3)表達(dá)系統(tǒng)。在2個(gè)系統(tǒng)中目的蛋白都得到了高效表達(dá)。
　　對(duì)PTE21a(+)-phyA/BL21(DE3)和PTE35b(+)-phyA/BL21(DE3)系統(tǒng)表達(dá)蛋白的表達(dá)量和生物活性進(jìn)行了比較研究。PTE21a(+)-phyA/BL21(DE3)系統(tǒng)表達(dá)的蛋白占菌體總蛋白的30%以上,主要以包涵體形式存在,經(jīng)復(fù)性后酶的比活力達(dá)到1500U/mg；PTE35b(+)-

3、phyA/BL21(DE3)系統(tǒng)表達(dá)的蛋白約占菌體總蛋白的20%,主要以溶解形式存在,酶的活力較低。經(jīng)比較后確定利用PTE21a(+)-phyA/BL21(DE3)系統(tǒng)進(jìn)行后續(xù)實(shí)驗(yàn)。
　　針對(duì)PTE21a(+)-phyA/BL21(DE3)系統(tǒng)表達(dá)蛋白以包涵體形式存在的問題,改進(jìn)了包涵體蛋白的復(fù)性方法,利用分子篩層析進(jìn)行復(fù)性、純化,取得了良好的效果。
　　對(duì)PTE21a(+)-phyA/BL21(DE3)系統(tǒng)表達(dá)蛋白的熱穩(wěn)定