琥珀酸半醛脫氫酶缺陷病基因突變研究.pdf

1、琥珀酸半醛脫氫酶缺陷病(succinic semialdehyde dehydrogenase defeciency,SSADH defeciency)是一種少見(jiàn)的常染色體隱性遺傳代謝異常性疾病，由SSADH缺陷引起。此病主要在嬰幼兒起病，臨床表現(xiàn)多樣化，最多見(jiàn)于神經(jīng)系統(tǒng)表現(xiàn)異常，主要包括發(fā)育延遲（其中動(dòng)作語(yǔ)言發(fā)育落后最為突出）、輕度至中度智力障礙、肌張力低下、行為異常（如孤獨(dú)癥樣表現(xiàn)，年長(zhǎng)兒往往存在焦慮、幻覺(jué)）、癲癇、運(yùn)動(dòng)過(guò)度、共濟(jì)失

2、調(diào)和反射減弱或消失等。SSADH編碼基因?yàn)锳LDH5A1，定位于6號(hào)染色體短臂2區(qū)2帶。目前基因型與臨床表型相關(guān)性報(bào)道較少，國(guó)內(nèi)尚無(wú)ALDH5A1基因突變的相關(guān)報(bào)道。
　　目的:
　　對(duì)SSADH缺陷病患兒及家系成員的ALDH5A1基因進(jìn)行突變分析，明確患兒基因突變位點(diǎn)及家系中突變位點(diǎn)的攜帶情況;為SSADH缺陷病患者家系的遺傳咨詢和產(chǎn)前診斷提供實(shí)驗(yàn)方法和新的診斷依據(jù)，阻止疾病在家系中的蔓延;提供研究群體的ALDH5A1基因

3、突變數(shù)據(jù)，探討中國(guó)人群ALDH5A1基因突變種類及特點(diǎn)，豐富中國(guó)人群SSADH缺陷病基因突變數(shù)據(jù)庫(kù)資料;也為新生兒篩查項(xiàng)目的遴選提供重要數(shù)據(jù)，從而達(dá)到優(yōu)生優(yōu)育的目的;結(jié)合臨床數(shù)據(jù)深入認(rèn)識(shí)患者的臨床表型，探討SSADH缺陷病基因型與臨床表型之間相關(guān)性，以利于SSADH缺陷病發(fā)病機(jī)制研究。
　　方法:
　　1.收集整理分析SSADH缺陷病患兒臨床病史資料和主要檢查結(jié)果。
　　2.應(yīng)用聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(PCR)和直接測(cè)序法對(duì)S

4、SADH缺陷病患兒ALDH5A1基因各個(gè)外顯子及其兩側(cè)部分內(nèi)含子序列進(jìn)行突變檢測(cè)分析。
　　3.對(duì)檢測(cè)到的突變用PCR-直接測(cè)序方法對(duì)患兒父母進(jìn)行突變攜帶情況檢測(cè)分析。
　　4.針對(duì)新突變采用特異性堿基錯(cuò)配引入限制性內(nèi)切酶方法，自行設(shè)計(jì)錯(cuò)配引物介導(dǎo)PCR，再用相應(yīng)的限制性內(nèi)切酶進(jìn)行酶切反應(yīng)，分析新突變?cè)谡Ｈ巳褐械陌l(fā)生頻率，以判斷新突變的性質(zhì)。
　　5.使用DNA MAN軟件對(duì)人類和其它種屬SSADH突變氨基酸序列進(jìn)行

5、同源性比較;模擬人類SSADH空間結(jié)構(gòu)分析突變對(duì)蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)的影響。
　　結(jié)果:
　　1.在本研究的7例患兒中臨床資料相對(duì)完整，發(fā)病年齡為12天～2歲，診斷年齡為86天～5歲，臨床表現(xiàn)有抽搐、語(yǔ)言和運(yùn)動(dòng)發(fā)育落后、肌張力低下、反射減弱、智力低下等，一般生化檢查均無(wú)異常（除一例因頻繁抽搐出現(xiàn)代謝性酸中毒外），腦電圖(EEG)和頭顱核磁共振（MRI）異常，氣相色譜-質(zhì)譜(GC-MS)檢測(cè)尿中γ-羥基丁酸、2，4二羥基丁酸、3，4二羥

6、基丁酸和4，5-二羥基己酸異常成分水平增高。
　　2.7例患兒均檢測(cè)出突變位點(diǎn)，共檢測(cè)到9種突變，其中c.527G＞A、c.691G＞A、c.1568C＞T、“c.839T＞G、c.904G＞A、c.1022C＞A、c.1383-2delA為尚未報(bào)道突變，突變c.538C＞T和c.545C＞T為已報(bào)道的多態(tài)性改變。突變類型以錯(cuò)義突變?yōu)橹鳌?例患兒中4例存在c.1568C＞T突變，占突變等位基因的42.9％(6/14等位基因)。患兒

7、基因突變均來(lái)自父母（除1例試管嬰兒之父外），為非新生突變。
　　3.新突變位點(diǎn)c.527G＞A、c.691G＞A、c.1568C＞T、c.1022C＞A在100例健康人中均未檢測(cè)到。
　　4.同源序列分析中p.Gly176Glu、p.Glu231Lys、p.Ser523Phe、p.Gly302Arg、p.Ala341Asp突變位點(diǎn)序列處于高度保守氨基酸區(qū)域，p.Va1280Gly突變位點(diǎn)處于保守氨基酸區(qū)域。
　　結(jié)論:

8、
　　1.在7個(gè)琥珀酸半醛脫氫酶缺陷病家系中共檢測(cè)出9種突變類型(c.527G＞A、c.691G＞A、c.1568C＞T、c.839T＞G、c.904G＞A、c.1022C＞A、c.1383-2delA、c.538C＞T和c.545C＞T)，其中錯(cuò)義突變6種，剪接缺失1種，多態(tài)性改變2個(gè)。其中7種新突變豐富了SSADH基因突變譜。
　　2.SSADH基因突變檢測(cè)發(fā)現(xiàn)中國(guó)人群突變類型以錯(cuò)義突變?yōu)橹鳎渲衏.1568C＞T突變?yōu)?/p>

9、熱點(diǎn)突變，占分析的42.9％。
　　3.本研究中患兒存在的突變等位基因位點(diǎn)，經(jīng)驗(yàn)證均分別源于父母（除1例試管嬰兒之父外），為非新生突變，并符合常染色體隱性遺傳規(guī)律。
　　4.本研究群體SSADH基因突變存在較高的遺傳異質(zhì)性，基因型與臨床表型關(guān)系較難確定。
　　5.限制性內(nèi)切酶酶切分析100名正常對(duì)照者均未顯示有突變位點(diǎn)的存在，故推測(cè)這些突變?yōu)橹虏⌒酝蛔儭?br>　　6.新發(fā)現(xiàn)的6種錯(cuò)義突變位點(diǎn)對(duì)應(yīng)的蛋白序列在7種種屬中